134:
Xurze Originalmitteilungen
460 bis 470 m H aufweist, wird in i 3 b e r e i n s t i m m u n g n i t bisherigen A n g a b e n 4~) v e r m u t e t , dab sowohl die orange wie die blaue K o m p o n e n t e im Blur der IIntersuchten I s o p o d e n u n d A m p h i p o d e n X a r o t i n o p r o t e i d e verschiedener Z u s a m m e n s e t zung darstellen. Eine genauere Analyse des g e s a m t e n P r o b l e m k o m p l e x e s wird an anderer Stelle gegebell werden~b). Die Untersuchullg w n r d e a m L a b o r a t o r i u m der Marine Biological Association in P l y m o u t h , EngIand, durchgeftihrt. D e m Direktor, Prof. F. S. RUSSELL, F . R . S . , sowie dem Stab, insbesondere Dr. G. W. BRYAN, d a n k e ich itir mallnigfache HiKe, d e n British Council fiir finanzielle Unterstiitzung.
I f . Zoologisches f n s t i t u t der Universitgt, W i e n 1, Dr. K a r l Lueger-Ring 7 WOLFGANG WINSIER Emgegangen am 2. November 1964 x) WATERMAn, T.H. (ed.) : The Physiology of Crustacea, Vol. I. New York-London: Academic Press 1960. - - ~) WIESXR, W. : Nature 191,1020 (l 96t ). - - ~) WIESER,W., U. I-[. MAKART: Z. Naturforsch. 16b, 8t6 (1961). - - * ) Goo~wlN, T.W.: a) in~), S. 127; - b) J. Marine Biol. Assoc. United Kingdom 4s, 2 (1965).
Die Naturwisselxschaften
Die abgestufte W i r k u n g der beiden I n d u k t o r e n Lactose u n d TMG ist sowohl in vivo bei der I n d u k t i o n der /~-Galactosiclase 5) als auch in vitro bei der E l l t h e m m u n g des Repressots der m-RNS-]Polymerase die gleiche. I n beiden Fitllen ist TMG besser als Lactose. Aus den B e f u n d e n geht d e m n a c h deutlich hervor, dab die Synthese der ~-Galactosidase in dem Stature E. coli K 12 in Abwesenheit eines I n d u k t o r s d u r c h eine EiweiBmolekel (Repressor) g e h e m m t ist. Der I n d u k t o r h a t d a n n die Aufgabe, diesen Repressor zu inaktivierena). Mit den v o r s t e h e n d mitgeteilten Versuchen glauben wit, ein weiteres T e s t s y s t e m x) gefunden zu haben, m i t dem es gelingt, die spezifische Wirkullg des Illduktors auf den Repressor d u r c h die Menge der s y n t h e t i s i e r t e n m - R N S nachzuweisen. W i r dankell Professor K. WALLENFELS fiir die U b e r l a s s u n g des Stammes. Die Deutsche P o r s c h u n g s g e m e i n s c h a f t u n t e r sttitzte die Arbeit n i t einer Sachbeihilfe.
Institut /i~r Therapeutische Frankfurt (Main)
Biochemie
der
Universitiig
A. WACKER, L. TI~GER u n d P. CHANDRA Eingegangen am 22. Januar 1965
Ein~lug yon Methyl-fl-Thiogalactosid und Lactose auf den ,,Repressor" der DNS-abhiingigen RNS-Polymerase Bei U n t e r s u c h u n g e n fiber den Mechallismus der E n z y m induktioll n i t Steroidell bei Pseudomonas testosteroni ~) fandeli wit, dab eine EiweiBfraktion aus nicht induzierten Zellen die m - R N S - P o l y m e r a s e wesentlich besser h e m m t , als die aus induzierten Zellen. Setzt m a n jedoch der nichtinduzierten F r a k tion eine kleine Menge Testosteron zu, so wird die H e m m u n g aufgehoben. E s w a r n u n interessant zu sehell, ob sich diese Befunde allf weitere ilidllzierbare Systeme (Enzyme) iibertragell lassen. W i t h a b e n d a h e r n a e h der gleichen Methode F r a k t i o n e n aus n i t u n d ohne Methyl-~-D-thiogalactosid (TMG) bzw. Lactose induzierten Zellen von E. coli K ~2 isoliert u n d ihren EinfluB auf DNS-abh&ngige 1RNS-Polymerase aus E. coli X 12 untersucht. Tabelle. Einflu/3 der Fraktionen aus induzierten ( I F ) und nichtinduzierten ( N I F ) Zellen yon E. coli K 1~ au[ die DNS-abhi~ngige R N S Po~ymerase-A ~tivit~ System~) Komplett . Ohne CTP. Kpl.+NIF
Ipm ] ATP ~}
I
1 4 8 7 0,3t7 30 0,006 880 0,187
I
SystemS) Kpl. + I F (TMG) . . K p l . + I F (Lactose) . Kpl.+NIF+TMG . Kpl. + N I F + Lactose
~) WACKER, A., J. DREws, W.B. P~ATT U. P. OtANDRA: Angew. Chemie 77, 172 (t 965). - - ~) CnA~IBERLIN,M., u. P. BERG: Proc. Nat. Aead. Sci. U.S. 4S, 8t (1962).--8) MDLLER-HILL,B., H.V. RICKENBERO U. K. WALLENFELS: J. Mol. Biol. 10, 303 (t964). - - 4) WALLEN~ELS, K., ~/i.L.ZARNITZ, ~ LAULE, H. B E N D E R Ii. ~. KESER: Biochem. Z. 331, 459 (~959). __s) JACOB, F., u. J. MONOD: J. Mol. Biol. 3, 318 (196t).
Einflu6 wiederholter iJstrogengaben auf die Triichtigkeit der Ratte Die E x p e r i m e n t e fiber den Einfiul3 v o n 0 s t r o g e n e n auf die Friihgravidit~t v e r m i t t e l n eli1 relativ einheitliches Bild. So k o m m t es n a c h H o r m o n g a b e l l in den ersten 7 T a g e n der Tr~ichtigkeit n i c h t zur Nidation, wShrend zwischen d e n 8. u n d 1t. Tag die E m b r y o n e n a b s t e r b e n oder resorbiert werdenX), 8). Tabelle. Wirkung yon O#rasid au] d@ Tri~chtigkeit. Entllahme llnd Messung der Feten am 20. Tag r.
Tier: 0,2mli.m.
N
Feten c)
tot
gew. g
(2 E
Ipm [ATP b) 1230 1188 / 1159 960
0,262 0,250 0,248 0,202
a) Kpl. = Komplett. - - b) ATP = eingebautes ATP-[H-3] in m~Mol. Das Reaktionsgemisch (0,38 ml) enthielt: GTP, CTP und UTP je 100m~xMoI, ATP-[IK-3] 100m~Mol (1%5 mgC/m~M); Tris t0 ~Mol; MnCI2 0,25 ~Mol, MgCI~ 1 m~xMol, B-Mercaptotithallol I v.Mol; pH 7,5; DNS (Lachsspermla, 2 0E, Cal. Biochem.). E. coli K t2-RNS-Polymerase ~) 0,t ml (20 ~ag Protein). Gewinnllng der Fraktionen: etwa I g feuchte Zellen yon E. coli K t2 in 10-~in Trispuffer, pH 7,4, Homogenisator (B. Braun, Melsungen) Glasperlell, 0,~7 m m ~, ansehlieBend bei 30000 • g 15 min llnd bei 105000 • g 45 rain zentrifugiert. 0berstand tiber Sephadex G 100 (Perlenform, Sgllle 1,6 • 30 em) mit 10-~ m Trispuffer Iiltriert. Die ersten bei 280m~. absorbierenden Fraktiollen wurden auf ihre RepressorAktivit~it getestet. Ausbeute etwa 10 ml (Proteillgehalt 0,2 mg/ml) Fraktionen aus nichtinduzierten Zellen (NIF) und induzierten Zellen (IF) n i t 20 ~g Protein pro Ansatz. Indllktor-Konzentration von Lactose bzw. TMG beim Zusatz zu NIP: 100 ~g pro Ansatz. E. coil K t2 wurde in Glycerin-Medium ~) bei 37 ~ kultiviert mid anschliegend 2 Std n i t 3 • 10" - i n Lactose oder 5 • 10-~m TMG illdllziert. Am Ende der log. Wachstumsphase wurde geerntet. $-Galaetosidase-Bestimmung naeh ~). Wie alls der Tabelle hervorgeht, h e m m t die F r a k t i o n aus den IIichtillduzierten Zellen (NIP) die Polymerase zu etwa 40 %, die F r a k t i o n aus den n i t Lactose illdllzierten Zellen zu etwa 20% u n d die aus den m i t T M G induzierteli Zellen isolierte F r a k t i o n zu etwa i 5 %. Setzt m a n der aus den nichtinduzierten Zellen gewonllenen F r a k t i o n (NIP) 100 Fg Lactose zu, so betr~igt die H e m m u n g n u t noch etwa 35 %, d u r c h Hinzuffigeli y o n 100 txg T M G wird sie auf etwa 20% vermindert. E r s t e Versuche weisen d a r a u f bin, dab die isolierte Fraktioli, n i t der die Lactose llnd T M G sowohl in vivo als s u c h in vitro reagieren, eili Proteill /st ( I n k u b a t i o n m i t E n z y m e n , t-Iitzeillaktivierung u. a.z).
Fr#he Trgchtigl~eit a) t0 I0 0 3,4 • 0,2 1t,0 =~ 0,8
A
3 • ErdnuB61
B
3 • 5y 0strasid = 3 x 23,8y/kg
15
14 8,7•
C
3 x 10~0strasid = 3 • 47,6~[kg
t0
l (2)
D
3 X 50y 0strasid : 3 X 2702//kg
4
0 (0)
E
3xS0w0strasid = 3 X 238 y/kg
F
0
2
4 3,6•
1
0
2
0 3,7[3,8
8
1
l
4
0
0
6
8
--
Spdte Trdichtig#e# b) [ t5 2,7• I 8,7 :h t,7 i
3 x 50), Progynon I t0 = 3 x 233y/kg [
5 9,04=2,0
= 3 x 500y/kg
8,0 ~= 2,7 ]
~215176176176
0
I
81
3 12,7~=0,2
I
013,0 0,,10
4
14
4 3
a) 4., 6. und 8. Tag. - - b) t2., t4. und 16. Tag. - - c) Oben Zahl der Tiere, unten Fetch im Mittel. - - d) Es bedeuten a Tiere ohne Anlagen, b Tiere mit kompletter Resorption, c Tiere mit vereh~zelten Resorptionen. Fiir vorliegende U n t e r s u c h u n g e n w u r d e n virginelle W i s t a r f a t t e n (t0 bis t 2 W o c h e l l air, 200 bis 220 g, Koloniezucht, Pellet-Alleinflltter) verwelldet. Als Beginn der Tr&chtigkeit w u r d e der Nachweis y o n Spermien im Vaginalabstrich gewert e t = 0. Tag. Die erforderlichell Verdtinnungen der H o r m o n pr¶te (0strasid u n d P r o g y l i o n - - B oleosum forte, V E B Berlin-Chemie) er~olgtell n i t destilliertem Erdnn1361. Bei einmaligen 0 s t r o g e n g a b e n in der Frfihgravidit&t (&Tag) fehlte entweder jeglicher ]?'rllchtallsatz, oder die Fetell w u r d e n bei zu niedrigen Dosen (unter 230 y 0 s t r a s i d / k g l~atte) n o r m a l ausgetragen. N a c h mehrmaligell H o r m o n g a b e n wShrelld der trrfihentwicklung erhielten wir analoge Ergebnisse (s. Tabelle, G r u p p e A bis D). Einmalige Gaben ill der SpStschwangerschaft (450 bis 500 y 0 s t r a s i d / k g a m t2. bzw t4. Tag) zeigten
