Heft 1959 (Jg.746)
K u r z e Originalmitteilungen
GERT, J.: Z. Elektroehem. 35, 728 ( t 9 2 9 ) . -
TRIVELLI, A.P.H.: J. Franklin Inst. 209, 373 (1930). - - MITCHELL, J.W.: Sonderheft d. Phot. Korr. 1957 u. J. Phot. Set. ~, 49 (1957). - - AR~NS, H.: VefiSfi. Agfa 6, 204 (~939), - - EGaEaT, J., u. W. NOD~ACK: Naturwiss. lS, 57 (1927). Neue Hydrazide votl Phosphorsiiuren
Die E x i s t e n z des y o n uns beschriebenen P h o s p h o r o x y t r i hydrazides x) OP(N2H3)a h a b e n wir u. a. durch die Darstellung des wasserlOslichen Acetonderivates O P ( N H - - N = C [ C H a ] e ) a aus abs. Aceton u n d dem festem Trihydrazid erneut bewiesen. - - I n analoger Weise erh~ilt m a n aus D i h y d r a z i d o p h o s p h o r s/iure-phenylester C6HsOP(N~Ha) ~ u n d Aceton bzw. MethylO iithylketon die e n t s p r e c h e n d e n Derivate C ~ H ~ O P ( N H - - N = O C[CH~]J~ u n d C~H~OP(NI-I--N:C[CHa]C~H~) ~. D u r c h Verseifen y o n C6H~OP(N~Ha) = mite NaOI-I und Ausfgllen mie O ~ t h a n o l gelangt m a n zu N a t r i u m d i h y d r a z i d o p h o s p h a t - H y d r a t NaPO~(N~Ha) e 9 H~O. Das entw/isserte Salz ,,sch/iumt" beim E r h i t z e n im H o c h v a k u u m bet fiber 250 ~ C und spaltet H y d r a z i n ab. Es e n t s t e h e n h y d r a z i n h a l t i g e ]
Eine Anzahl y o n M e t h o d e n zur B e s t i m m u n g der Ascorbinsiiure (AS) einerseits bzw. der P e r o x y d a s e andererseits ful3en auf der Tatsache, dab AS ein S u b s t r a t der P e r o x y d a s e ist. Es werden, im Falle der Messung der A k t i v i t g t tines Pero x y d a s e p r g p a r a t e s , b e s t i m m t e Mengen AS vorgelegt oder, bet der A S - B e s t i m m u n g , Peroxydase-Pr~iparate b e k a n n f e r A k f i v i t g t verwendet. Zur E r k e n n u n g des E n d p u n k t e s der Reaktion, d.h. der vollstiindigen O x y d a t i o n der AS zur Dehydro-AS, linden I n d i k a t o r e n Verwendung, deren oxydierte F o r m anders gefiirbt ist als die reduzierte (2,6-Dichlorphenolindophenol, Benzidin n. a.). -- W i t bedienten uns bet der B e s t i m m u n g der AS der y o n SIMAI
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trium) als I n d i k a t o r dient. Sofern der Ansatz auBer dem Substrat, der w~iBrigen L 6 s u n g des gereinigten E n z y m t r o c k e n pr/iparates, dem Puffer, I n d i k a t o r u n d W a s s e r s t o f f p e r o x y d keine anderen Stoffe enthglt, arbeitet diese Methode zur Zufriedenheit. Der E n d p u n k t der IReaktion, d.h. der vollst/indigen O x y d a t i o n der Ascorbinsgure, wird d u t c h den F a r b u m s c h l a g von blau nach helIgelb angezeigt. Sind jedoch noch andere S u b s t a n z e n im E x t r a k t v o r h a n d e n , ]~iBt die Genauigkeit der Methode s t a r k nach, nnd es ergeben sich -- wie gezeigt wird -- iiberhaupt irrefiihrende Ergebnisse. ])as gleiche gilt naturgemgf3 bet der B e s t i m m u n g der Peroxydase, w e n n yon E n z y m e x t r a k t e n u n d nieht y o n T r o c k e n p r g p a r a t e n ausgegangen wird. Vor k u r z e m berichteten 1VJ[ATKOVICS, ]~OVACS u n d BuzAs 2) darfiber, dal3 kleine Mengen y o n Acetaldehyd oder Alkohol die Oxydationszeit der AS auf 1/6 verkfirzen. W i t erzielten mit N t h a n o l ghnliehe V\7erte, jedoch bet ~Verwendung anderer Alkohole und organischer L6sungsmitteI, wie sie ffir die Herstellung y o n E x t r a k t e n aus organischem Material iiblich sind, teilweise erheblich dariiber h i n a u s g e h e n d e Ergebnisse. Der Ansatz b e s t a n d in A n l e h n u n g an MATKOVlCS aus: 5 ml AS ( = 2 9 10 -4 Mol) ; 2 ml P h o s p h a t p u f f e r 0,15 m, pla 5,6; 2 ml I n d i g o c a r m i n l 6 s u n g ( = 2 9 t 0 - a M o l ) ; 2 ml m H 2 0 ~ (ohne Stabilisator); I mI E n z y m l 6 s u n g (aus Meerrettich-Peroxydase-Trockenprgparat). Die Zus/itze w u r d e n im allgemeinen in einer Menge y o n 1%, bezogen auf das S u b s t r a t , a n g e w e n d e t ( = 2 9 l0 -~ Mol), wobei h e r v o r g e h o b e n set, dab auch noch t 9 10 -~ Mol Methanol = 3,2 7 die IReaktionsgeschwindigkeit u m das vierfache erh/)hte. Ohne AS finder keine E n t i ~ r b u n g des I n d i k a t o r s start. Tabelle. Oxydation yon A S durch Peroxydase mit und ohm Zusalz einiger organischer LOsungsmittel. Ent/drbungszeit in rain Zusatz
rain
Zusatz
min
Ohne . . . . . . Methanol 64 7 . . Methanol 3,2 7 . . ~'~thanol . . . . . n-Propanoi . . . .
47 2 12 5,4 2
iso-Propanol... n-Butanol . . . . Oktylalkohol . . Azeton . . . . . ~ther . . . . . .
8,35 | ,85 4,3 19,2 2,63
Es ist also n i c h t ang~ingig, diese Methode ffir AS-Bestim= m u n g e n anzuwenden, w e n n die P f l a n z e n e x t r a k t e z.B. zur Stabilisierung derartige organische LOsungsmittel enthalten. -Auch andere S u b s t a n z e n kOnnen die Oxadytionsgeschwindigkeit der AS beeinflussen, w e n n auch nicht so s t a r k u n d in entgegengesetzter Weise. So h e m m t e n z.B. Galluss~ure, Cystein u n d Kaffees~iure in w~iBriger LOsung die Oxydation. Bet V e r w e n d u n g y o n t %, bezogen auf AS, d a u e r t e es bei einem Versuch, bet dem das S y s t e m 14affeesSmre enthielt, durchschnittlich 52 rain, bei Cystein u n d Galluss~iure 59 min bis zur E n t f i i r b u n g des Indikators. Die I-Iemmung d u t c h Polyphenole (Galluss/iure, Kaffees&ure) bet der O x y d a t i o n der AS d u t c h L u f t s a u e r s t o f f ist schon lgnger b e k a n n t . Die Oxydationsgeschwindigkeit ist hier in alkalischer LOsung h6her als in saurer. W i r v e r w e n d e t e n in A n l e h n u n g an v. EULXR 3) ein p s e u d o e n z y m a t i s c h e s S y s t e m aus KupfersulfatlOsung (10y Cu/Ansatz), Weins~iure (20y/ Ansatz), 5 ml P h o s p h a t p u f f e r pt{ 7,6 sowie AS ( : 4 9 t0 .5 Mol) und Dichlorphenolindophenol u n d bel/ifteten. D u r c h s c h n i t t lich verstrichen 38 rain bis zur vOlligen O x y d a t i o n der AS. -2 9 10 -~ Mol Brenzcatechin ( = 5% bezogen auf AS) h e m m t e n , so dab es his zur E n t f g r b u n g 43 rain dauerte. Noch viel st~irkere H e m m u n g e n b e w i r k t e n Quercetin (53 min), l~affeesiiure (55 min.) und Chlorogensiiure (98 rain). I n t e r e s s a n t ist, dab kleine Mengen, 2 9 10-6 Mol, Methanol u n d n - P r o p a n o l die O x y d a t i o n fOrderten (32 rain), was ebenfalls mit den oben beschriebenen E r g e b n i s s e n iibereinstimmt. Die Frage, ob es sich bet den erw~ihnten Stoffen u m echte A k t i v a t o r e n bzw. I n h i b i t o r e n der P e r o x y d a s e h a n d e l t oder ob sie auf andere A r t u n d Weise ant das S y s t e m einwirken, mOchten w i t vor1/iufig offenlassen und v e r m 6 g e n auch noch nicht zu entscheiden, ob eine D e h y d r a s e - W i r k u n g vorliegt.
Biologische Zentfalanstalt der Deutschen A kademie der L a n d wirtscha/tswissenschaften z u Berlin, Instit~t /~ir Phytopathologie, A scherdeben ]~ERMANN HERZMANiXI
Eingegangen am 5. Februar t959 ~) SIgAKOFF, P.V.: Biochimija 16, 53 ( t 9 5 1 ) . 2)MATKOVlCS, B., E. I
