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Naturwissenschaflen

Kurze Originalmitteilungen

Experimenteller Tell : E s f i n d e n 2t y o n F a t i e n t e n isolierte, v o r w i e g e n d p o l y r e s i s t e n t e S t a m m e v o n Myc. t u b e r c u l o s i s Verw e n d u n g . Die H e r s t e l l u n g einer h o m o g e n e n S u s p e n s i o n erfolgt in iiblicher W e i s e y o n d e n a u f f e s t e m N ~ h r b o d e n ( t I o h n IV) a n g e z i i c h t e t e n B a k t e r i e n . A l i q u o t e Anteile der S t a m m s u s p e n s i o n w e r d e n m i t e i n e m N a t r i u m - C i t r a t - P u f f e r y o n bes t i m m t e m p H - W e r t v e r d f i n n t , ~2p (NaH28epo4) u n d T u b e r k u l o s t a t i k a in waBriger steriler L 6 s u n g zugesetzt, diese A n s~tze b e s t i m m t e Zeit (bis zu 48 ~) bei 37~ i n k u b i e r t . AnschlieBend wird d u r c h Z e n t r i f u g a t i o n die B a k t e r i e n m a s s e y o r e K u l t u r f i l t r a t g e t r e n n t . Die M e s s u n g der " ~ P - A k t i v i t a t des K u l t u r f i l t r a t e s g e s c h i e h t m i t Hilfe eines Geiger-Miiller-Zahlrohres in V e r b i n d u n g m i t e i n e m K e r n s t r a h l u n g s m e B g e r ~ t (Trockenp r ~ p a r a t a u f P o l y s t y r o l s c h ~ l c h e n ) . D e r a2P-Einbau in die B a k terien wird d u r c h D i f f e r e n z b i l d u n g b e r e c h n e t . Ergebnisse : Bei allen u n t e r s u c h t e n T u b e r k u l o s t a t i k a (Isoniazid, S t r e p t o m y c i n , p - A m i n o s a l i e y l s ~ u r e , Cycloserin, P y r a z i n a m i d , ~ t h i o n i a m i d u n d Isoxyl) wird der a 2 P - E i n b a u des sensiblen S t a m m e s in e i n e m b e s t i m m t e n K o n z e n t r a t i o n s b e r e i c h u n d bei e n t s p r e c h e n d e m p H - W e r t des S u s p e n s i o n s m e d i u m s a n n g h e r n d p r o p o r t i o n a l der z u g e s e t z t e n T u b e r k u l o s t a t i k a K o n z e n t r a t i o n inhibiert. Die H e m m k o n z e n t r a t i o n liegt e t w a u m 2 - - 4 P o t e n z e n h 6 h e r , als z u r I n h i b i t i o n der V e r m e h r u n g der B a k t e r i e n erforderlich ist. A n M o g e K o n z e n t r a t i o n s e r h 6 hungen sind aueh beim Einsatz yon Fermentinhibitoren notw e n d i g ~10~. W e r d e n r e s i s t e n t e S t ~ m m e in die U n t e r s u c h u n g e n einbezogen, dann e r g e b e n sich r e c h t b e m e r k e n s w e r t e U n t e r s c h i e d e . Bei d e n T u b e r k u l o s t a t i k a Isoniazid, S t r e p t o m y c i n , p - A m i n o s a l i c y l sabre, P y r a z i n a m i d u n d A t h i o n i a m i d bleibt i m G e g e n s a t z z u m s e n s i b l e n S t a m m der a2P-Einbau bei e n t s p r e c h e n d e n K o n z e n t r a t i o n e n w e i t g e h e n d u n b e e i n f l u B t oder wird s t i m u l i e r t . I n G e g e n w a r t y o n Cycloserin u n d I s o x y l w e r d e n beide P o p u l a t i o n e n zwar gleichsinnig, a b e r in u n t e r s c h i e d l i c h e m A u s m a B beeinfluBt. Die U n t e r s c h i e d e z w i s c h e n s e n s i b l e n u n d r e s i s t e n t e n S t a m m e n bleiben a u c h d a n n erhalten, w e n n bei e i n e m oder bei b e i d e n S t a m m e n ein S e n s i b i l i t ~ t s v e r l u s t gegen ein oder m e h r e r e andere Mittel a n f t r i t t . (Es k o n n t e n allerdings n i c h t alle theo~ r e t i s c h d e n k b a r e n K o m b i n a t i o n e n geprfift werden). D u t c h V e r a n d e r u n g des p I I - ~ r e r t e s u n d d e r I n k u b a t i o n s z e i t w e r d e n V e r s u c h s b e d i n g u n g e n geschaffen, die einen E i n s a t z dieses V e r f a h r e n s z u r R e s i s t e n z b e s t i m m u n g bei d e n T u b e r k u l o s t a t i k a I s o n i a z i d (10 .8 u n d t 0 - ~ m , 24 ~ bei p..H 5), Strept o m y c i n (10 -~ u n d t 0 - 2 m , 48 ~ bei p H 7) u n d ~ t h i o n i a m i d (t0 -a u n d 10-3m, 48 ~ bei p H 5) a u s s i c h t s r e i c h e r s c h e i n e n lassen. W e i t e r e V e r s u c h e fiber R e p r o d u z i e r b a r k e i t u n d E m p findlichkeit der M e t h o d e sowie z u r V e r g r 6 B e r u n g der Differ e n z e n bei d e n fibrigen M i t t e l n s i n d i m Gange. Eingegangen am 31. Januar 1966 [1] SC~A~ER, W. B . : A m . Rev. Tubere. 69, 125 ( 1 9 5 4 ) . - [~] COHG M. L., C. L. D ~ w s u. G. Mm~L~BROOK: Am. Rev. Resp. Dis. 86, 95 (t962). - - [8] KI~OOER-TmE~ER, E.: Naturwissenschaften 44, 425 (1957). - - ~] B6~CKE, R.: Beitr. Kiln. Tuberk. 117, 171 (1957). - [g~ S ~ Y ~ Z , J.: II. Internat. Symposium ,,Bakteriologie End Biochemie der Mykobakterien", 20.--24. I0. 1963, S. 414. - - [6] T s u ~A~UR~, M., u. S. TSUK~UR~ : Am. Rev. Resp. Dis. 89, 572 (1964).-[7] TYSAROWSKI, W.: Bull. acad. polon, sci., Classe II 11, t41 (1954). - - [8] POKOR~Y, J., H. IWA~NSKY u. H. REgTOE~: Naturwissenschaften Sl, 316 (1964). - - [9~ IWA~NSKY,H., H. REUTOEN U. J. POKORNY: Nucl-Med. 3, 426 (1963). - - [10] Mt~LLER, G., It. IW~NS~'Z u. K. TKUF~L: Z. Naturforseh. 15b, 180 (1960).

n e s a n g e n o m m e n w e r d e n k a n n . Diese F r a g e h a n g t e n g d a m i t z u s a m m e n , in w e l c h e m A u s m a B die natfirlich a b l a u f e n d e S y n t h e s e y o n T h y m i d y l s g u r e d u t c h a t I - T d R bzw. d e s s e n P h o s p h o r y l i e r u n g s p r o d u k t v e r d r a n g t wird. 5 G r u p p e n zu je 4 M a u s e n erhielten i. v. t 0 - - t 0 0 } C 8tt-TdlR, wobei v o n G r u p p e zu G r u p p e d a s P r a p a r a t m i t s t e i g e n d e n M e n g e n y o n i n a k t i v e m T d R v e r d i i n n t wurde. D e r obere A b s z i s s e n - M a B s t a b der Fig. 1 gibt die pro M a u s (23 g; N M R I ) injizierte T d R - M e n g e wieder. Ftir d e n D i i n n d a r m w u r d e b i o c h e m i s c h die spezifische A k t i v i t a t d e r D N S u n d a u t o r a d i o g r a p h i s c h der m i t t l e r e a l l - I n d e x ( = 15,7% b e z o g e n a u f alle Zellarten) g e m e s s e n . H i e r a u s u n d a u s der - - y o n G r u p p e zu G r u p p e a b n e h m e n d e n - - spezifis c h e n A k t i v i t a t des injizierten a H - T d R , der V e r s u c h s d a u e r (30 min) u n d der D a u e r der D N S - S y n t h e s e (8 Std) k a n n d e r M e n g e n a n t e i l des a t t - T d R a n d e r g e s a m t e n D N S - S y n t h e s e ber e c h n e t werden. Fig. I zeigt d a s E r g e b n i s . Die O r d i n a t e gibt d e n p r o z e n t u a l e n M e n g e n a n t e i l des injiziert e n aH-TdR an der D N S - S y n t h e s e wieder. Bei I n j e k t i o n v o n 36

ioo~ a6

a60 ,U.g 0"600

/I %

//

Y

/ o~:Io

1oo

/000

I0000 ~ C

I00000

Fig. I. Prozentualer Anteil yon all- oder 14C-TdR an der DNSSynthese des Diinndarms der Maus. Ordinate: Mengenanteil des inj. T d R an der gesamten DNS-Synthese; obere Abszisse: Inj. TdRMenge (i. v.) in ~xg pro Maus (23 g); uutere Abszisse: Aktivit~it, berechnet ftir ein ~H-TdR konstanter spez. Akt. yon 6700 mC/mM, in vC SH-Thymidin pro Maus

10 ~xC a t I - T d R pro M a u s ( ~ 0,36 [zg T d R bei 6700 m C / m M ) b e t r a g t die m e n g e n m ~ B i g e B e t e i l i g u n g des injizierten T d R n u r 0,1%. Die D N S - S y n t h e s e wird bier fiberwiegend a u s der a u f physiologischem Wege entstehenden Thymidylsaure bestritten. A u s Fig. I k a n n e n t n o m m e n w e r d e n : t. Die p r o z e n t u a l e B e t e i l i g u n g des injizierten T d R n i m m t bei I n j e k t i o n gr6Berer TdR-Mengen zn. 2. Bei I n j e k t i o n y o n 0 , 3 6 - - 3 6 ~tg T d R pro M a u s (formal = 1 0 - - t 000 [zC aH-TdlR einer spezifischen A k t i v i t a t y o n 6700 m C / m M ) s t e i g t d e r p r o z e n t u a l e A n t e i l linear m i t der injizierten T d R - M e n g e an. Die in d i e s e m Fall injizierten T d R - M e n g e n sind o f f e n b a r "tracer"-Dosen. FLier ist die i n t r a n u k l e a r e K o n z e n t r a t i o n des a H - T h y m i d i n p h o s p h a t s viel kleih e r als die K o n z e n t r a t i o n der a u f n o r m a l e m "vVege e n t s t e h e n d e n T h y m i d y l s a u r e . A h n l i c h e E r g e b n i s s e f a n d e n STEWART et al. [11. Fiir I n j e k t i o n e n s e h r groBer T d R - M e n g e n (ganz r e c h t s in Fig. 1) gilt d a s U m g e k e h r t e . Fig. I gilt sinngemXB a u c h fiir laC-TdR, w e n n a u f die TdR-Menge b e z o g e n wird.

w . LANG, CIr. PILGRI~ u n d W. MAULER

Parallel zu diesen b i o c h e m i s c h e n V e r s u c h e n w u r d e ffir Iiinf a n d e r e Z e l l a r t e n a u t o r a d i o g r a p h i s c h die K o r n z a h l / K e r n bes t i m m t . Die E r g e b n i s s e zeigen, d a b Fig. 1 n i c h t n u t ffir d e n D a r m , s o n d e r n a u c h ffir weitere Z e l l a r t e n gilt.

I n s t i t u t f a r Medizinische I s o t o p e n f o r s c h u n g der U n i v e r s i t a t , t(6In

Eingegangen am l7. Jaguar t966

E s h e r r s c h t w e i t g e h e n d U n k l a r h e i t dariiber, ob bei a u t o r a d i o g r a p h i s c h e n V e r s u c h e n m i t a H - T h y m i d i n (3H-TdR) die K o r n zahl pro K e r n als ein MaB fiir die D N S - S y n t h e s e r a t e eines K e r -

[1] STEWART, P. A., H. QUASTLER, M. R. SKOUOAARD, D. R. WIIVIBER, IV[.F. WOLFSBERG, C. a . PI~RROTTA, B. FERBEL, and M. CARLOUG~: Radiation Research 24, 521 (1965).

Prozentualer Anteil von all- oder ~4C-Thymidin an der DNS-Synthese yon Zellarten der Maus