BIOLOGIA PLANTARUM (PRAHA) 17 (5} : 339--346, 1975
Untersuchungen tiber die Regulation der DNS-Synthese w ~ i h r e n d d e s A k t i v i t ~ i t s w e c h s e l s y o n Agrostemma githago-Samen
M. HECKER Sektion Biologie, FG Allgemeine Botanik und Pflanzenphysiologie, Universitat Greifswald*
The Ilefulatlon of DNA Synthesis in Inhibited and Activated Agrostemma githago Seeds Abstract. The relationships between DNA synthesis and germination capacity of Agrostemma seeds have been studied. Protein synthesis and RNA synthesis are activated at the very beginning of imbibition, whereas DNA synthesis starts in the second part of the imbibition phase. Agrostemma seeds inhibited by higher temperature (30 ~ or aged seeds with a low germination capacity are characterized by a remarkably reduced protein synthesis. DNA synthesis is also reduced. The inhibition of protein-synthesis of Agrosterama embryos fed with eyeloheximid or aetinomyein D causes a depression of DNA synthesis. These results indicate that the initiation of DNA synthesis of imbibing Agrostemma seeds depends on the synthesis of special proteins. Abseisie acid inhibits growth as well as DNA synthesis of isolated Agrostemma embryos. Mitomyein inhibits germination and DNA synthesis to the same extent. Dormant seeds with an undiminished intensity of protein synthesis also show a reduced incorporation of 3H-thymidine inDNA. We suggest that DNA synthesis of imbibed seeds, which is a necessary prerequisite for the radicle protrusion, is involved in the mechanism of afterripening of the Agrostemma seeds. Additional index words: seed dormancy; seed germination; viability of seeds; abscisio aoid; mitomyein. Der Aktivit~tswechsel yon Samen stellt ein besonders geeignetes Modell dar, die Funktion yon Nucleins~ure- und Proteinbiosynthesen bei Entwicklungs- und Differenzierungsprozessen zu untcrsuchen. Dabei werden Samen, deren Entwicklung such bei giinstigen Milieubedingungen (Wasserangebot, Temperatur) blockiert ist, und Samen, die im Verlauf natfirlicher Nachreifeprozesse einen Zustand hoher physiologischer Aktiviti~t erlangt haben, vergleichend analysiert. Die RNS- und Proteinbiosynthesen setzen in nachgereiften AgrostemmaE m b r y o n e n u n m i t t e l b a r n a c h Q u e l l u n g s b e g i n n ein. D o r m a n t e , d . h . n i c h t n a c h g e r e i f t e S a m e n y o n A g r o s t e m m a githago s i n d i n d e r Q u e l l u n g s p h a s e weder durch eine verminderte RNS- noch Proteinsyntheseintensit~t zu c h a r a k t e r i s i e r e n (HECKER u n d M~3LLE~, u n v e r S f f e n t l i c h t , HECKER 1974b), Eingegangen am 31. Juli 1974 * Adresse: Sektion Biologic, Ernst-Moritz-Arndt-Universit~t, DDR-22 Greifswald, Grimmer Str. 88. 339
340
M. HECKER
so dab wit uns den Dormanzkonzeptionen yon BONNER (1965) und AMEN (1968) nieht anseMieBen konnten, die besagen, dab ruhende pflanzliche Verbreitungseinheiten dutch eine generelle Genrepression oder dutch eine erheblich verminderte Stoffwechselaktivitit gekennzeichnet sind. Nach unseren Befunden geniigt eine hohe I n t e n s i t i t der Protein- und RNS-Synthese allein noch nieht, u m die Radicula zum Durchbreehen der Testa anzuregen. Wahrscheirdicher ist, dab nur wenige und ganz spezifische Eiweil~synthesen, die dutch Ineorporationsexperimente kaum zu erfassen sind, fiber die Brechung der Samenruhe entscheiden (HECKER und BORRISS, im Druck, vergl. auch BORRrSS et al. 1972). Zur Erhiirtung dieser Arbeitshypothese ist der Nachweis solcher TriggerMechanismen der Keimung, die dutch Nachreifeprozesse aktiviert werden, erforderlich. Wit konnten zeigen, dal~ ausschlieBlich in nachgerefften Agrostemma githago-Samen die DNS-Synthese vor dem Radiculadurchbruch ansteigt, wi~hrend quellende dormante Samen wesentlich weniger aH-Thymidin in DI~IS einbauen. Dabei diirfte die Aufnahme der DNS-Synthese in der Quellungsphase v o n d e r Bildung spezifischer Proteine abhangig sein. Unsere Befunde lassen den SchluB zu, dab die hohe Dl\lS-Syntheseintensitat quellender Samen eine notwendige und wesentliehe Voraussetzung ffir den Keimungsprozel~ darstellt. Der Nachweis, dal~ SH-Thymidin yon quellenden Agrostemma-Embryonen in DNS eingebaut wird, wurde an anderer Stelle erbracht (HECKER und H U T H 1975). Material und Methoden Als Untersuehungsobjekt dienten naehgereifte Samen yon Agrostemma githago L. cv. 'Gatersleben', E r n t e 1973 (vergl. BORRISS 1940), die in Petrisehalen auf feuehtem Fliel~papier bei 20 ~ im Dunkeln angequollen wurden, dormante Samen, deren Naehreife d u t c h Lagerung bei tiefen T e m p e r a t u r e n (--20 ~ verhindert war, sowie temperaturbloekierte Samen (vergl. Ergebnisse, Teil 2). Naeh einer bestimmten Quellungszeit wurden die E m b r y o n e n aus den Samen isoliert u n d in 2,5 ml einer 10-ZM KCI-/10-SM CaCl~-LSsung inkubiert, die 10~tCi SH-Thymidin-(methyl) (spez. Aktivit~t 5,6 Ci mmol -i) enthielt. Bei gleiehzeitiger Bestimmung der Protein- oder RNS-Synthese wurden noch 1 ~tCi iaC-L-Leucin-(u) (spez. Aktivit~t 185 mCi mmol -i) bzw. 0,5 IzCi i4C-Uraeil-(2) (spez. Aktivit~t 53 mCi mmol -i) dazupipettiert. Die I n k u b a t i o n s d a u e r betrug zwei Stunden. Bei der Untersuchung des Einflusses von P h y t o h o r m o n e n bzw. I n h i b i t o r e n a u f die DNS-Synthese wurden die E m b r y o n e n aus 6 Stunden bei 30 ~ angequollenen Samen isoliert u n d einige Zeit a u f feuchtem FlieBpapier, das m i t der WirkstofflSsung g e t r i n k t war, bei 30 ~ im Dunkeln gehalten. Naeh der g e w i h l t e n I n k u b a t i o n s d a u e r sehlolS sich die zweistiindige Pri~eursor-Ineorporation an. I m Ansehlul3 a n die Behandlung m i t radioaktiv markierten Vorstufen wurden die E m b r y o n e n m i t einer eiskalten 0,01 M Thymidin-, Uracil- bzw. L-Leuein-LSsung gewasehen u n d die noeh adsorbierten markierten Verbindungen m i t einem seharfen Wasserstrahl abgespiilt. Die so behandelten E m b r y o n e n wurden in Reibschalen fiber I~acht bei --20~ aufbewahrt, d a n n bei 3 ~ m i t etwas Quarzsand u n d insgesamt 4 ml E x t r a k t i o n s m e d i u m (0,05 IV[ Tris-HC1-Puffer p H 7,5; 0,002 M MgSO4; 0,5 ~ Na-Dodeeylsulfat) homogenisiert. Die Bestimmung der Priicursor-Aufnahme u n d des E i n b a u s in Triehloressigs~ure.fiillbares Material wurde naeh den Angaben yon MANS mid I~OVELLI (1961) darehgefiihrt. Die R a d i o a k t i v i t i t wurde in einem Flfissigkeitsszintillationsspektrometer (Packard, Modell Tri Carb 3320) b e s t i m m t (vgl. HEC~.ER 1974a). I m Doppelmarkierungsansatz erfolgte eine getrennte Messung der SH. u n d i4C-Radioaktivit~ten, wobei bei der E r m i t t l u n g der SH-Aktivit~ten der iaC-Anteil im s t t - K a n a l (spill over) berfieksiehtigt u n d substrahiert wurde. Die Syntheserate wurde in Impulsen pro Minute u n d E m b r y o bzw. bei identiseher Aufnahmerate in ~ E i n b a u bezogen a u f die G e s a m t a u f n a h m e angegeben.
341
REGULATION DER DNS-SYNTHESE
Ouellungsphase
100
I I
Kelmungsphase
0
3H-Thymldln - Elnbau -Koetrol= (nach 20 h)
I; Ketmung (nach 28h)
~0
40
7s
iiiilInnRRHo_ f(ontroIle
30
~so
Z
>-
2
0 Z 50~
112
2s
25
7 lo J
P
r
~ tO
1
20 ZEELT [h]
I
11
30
40
0
0
50 100 200 300 MITOMYCIN [~g I~nl"1]
Abb. 1. Verlauf der Protein-, RNS- u n d DNS-Synthese in quellenden u n d keimenden Agrostemma githago-Embryonen. Angabe der Proteinbiosynthese (14C-L-Leuein-Einbau) u n d der RNS-Synthese (14C-Uracil-Einbau) als relative E i n b a u r a t e n zum Vergleieh (HECKE~ u n d M~3LLE~, unverSffentlicht). Abb. 2. Einflul3 yon Mitomyoin a u f die Keimung und DNS-Synthese naehgereifter Agrostemma githago-Samen. Mitomyein wurde i n t a k t e n Samen appliziert.
Er9ebnisse I. DNS-Synthese und Samenkeimun9
Die RNS- und Proteinbiosynthesen setzen in Embryonen aus nachgereiften Agrostemma-Samen unmittelbar mit Quellungsbeginn ein und erreichen noch welt vor dem Radiculadurchbruch ein Maximum, das bis zum AbschluB der Quellungsphase beibehalten wird (HECKER und MOLL~R, unverSffentlicht). Dagegen l&Bt sich erst nach etwa 15 Quellungsstunden ein deutlicher 3H-Thymidin-Einbau in DNS nachweisen, der allerdings noch vor dem eigentlichen Keimungsbeginn markant ansteigt (Abb. 1). Um die Bedeutung der DNS-Synthese fiir die Keimung zu priifen, war eine Behandlung intakter Samen mit Mitomycin erforderlich. Dabei muBten sehr hohe Mitomycin-Konzentrationen verwandt werden, da die Testa die Antibiotika-Aufnahme stark behindert. 20 und 50 ~g Mitomycin m1-1 iiben kaum einen EinfluB auf die Keimung und DNS-Synthese aus. Mit zuTABELLE
1
EINFLUS~ VOI~ M I T O M Y C I N I~ND R N S - S Y N T H E S E
(300 ~g m1-1) V~D ACTINO~u
INTAKTER
(100 ~g m1-1) AUF DIE KEIMU~O
Agrostemma githago-SAMEZV
Bestimmung der RNS-Synthese: Naeh 18 Quellungsstunden. Bestimmung der Keimung: Naoh 28 h, 20 ~ Ffitterung der Agrostemma-Samen m i t 10 ~Ci 3H-Uracil-5 T (spez. Aktivit~t 0,9 Ci mmol-1). Angabe der Aufnahme- u n d E i n b a u r a t e in: Impulse pro Minute u n d Embryo. Variante
3H-Uracil - Aufnahme Einbau
% Einbau
% Keimung naoh 28 h
Kontrolle
3382
1434
42,4
60
300 Izg Mitomycin
3578
1539
43,0
2
100 ~g Aetinomyein
3867
1724
44,6
64
$42
M. HECKER 100
tOO
=;
75
~3
N
O Z50
I
Ouellung
I
Kelmung
~s
~o _o
25 i
D I
10
20
30 40 ZEIT [ h ]
50
60
70
, 10
30
20
40
ZEIT [11]
100
m
iiii
~
0 ACTINOMYCIN CYCLOHEXIMID [pg ml-I]
Abb. 3. Keimungsverhalten yon dormanten, entwieklungsbereiten und temperaturbloekierten Samen yon Agrostemma githago. Quellungstemperatur: 20 oder 30 ~ D - - dormant, N - - naehgereift, 20 ~ 30 - - nachgerefit, 30 ~ Abb. 4. DNS-Synthese (~o Einbau von aH-Thymidin bezogen auf die Gesamtaufnahme) dormanter (D), naehgereifter (N) und temperaturbloekierter (30)Agrostemma githago.Embryonen wfiahrend der Quellung und Keimung. Keimung naeh etwa 25 h. Abb. 5. Einflul~ von Actinomyein und Cyeloheximid auf die DNS-Synthese isolierter nachgereifter Agrostemma-Embryonen. Isolation der Embryonen naeh 6 Quellungsstunden, 18 h Inkubation auf feuehtem Flie~papier mit Aetinomyein bzw. Cyelohexlmid, 2 h Inkubation mit 10 ~Ci 3tt-Thymidin: 6 -t- 18 -t- 2 (26).
nehmender Mitomycin-Konzentration (yon 100 bis 300 ~g ml -i) werden sowohl der Thymidin-Einbau als auch die Keimung inhibiert, wobei die Keimungshemmung mit einer verminderten DNS-Syntheserate parallel verl~uft (Abb. 2). Intakten Samen appliziertes Mitomyein beeinflu~t nicht die RNS-Synthese (Tabelle 1, vergl, aber Tabelle 3). Actinomycin D hemmt in einer Konzentration yon 100 Ezg ml -i weder die Keimung noch die RNS-SynTABELLE 2 KEIMUNGSVERHALTEN UND DNS-SYNTHESE QUELLENDER UND KEIMENDER Agrostemma githagoSAMEN UNTERSCHIEDLICHER JAHRG.~GE. Angabe der Einbaurate: Impulse pro Minute und Embryo nach insgesamt 17 Quellungsstunden Jahrgang
Keimung nach 42 h [%] 3H-Thymidin-Einbau
1972
1970
1968
1966
1964
1962
98
93
90
7
0
0
294
235
142
84
34
11
343
REGULATION DER DNS-SYNTHESE TABELLE 3.
EINFLUSS VON MITOMYCII~(100 ~g m1-1) Au~ WACHSTUM,DNS-, RNS- tr~D PROTEINBIOSY~TtIESE ISOI,IERTER NACHGEREI~ER Agrostemma githago EmattYON-~N Isolation nach 6 h Quellung, 22 h Inkubation auf feuch~om Flie~papier, das mit Mitomycin getrankt war, 2 h Inkubation in 10 ~tCi 3H-Thymidin, 0,5 tzCi laC-Uraeil bzw. in 1 ~tCi 14C-L-Leucin (DNS- trod RNS-Synthese bzw. DNS- mad Proteinsynthese nach Doppelmarkierung bestimmt). 6 -{- 22 -{- 2 (30). Angabe der Syntheserate: % Einbau bezogen auf die Gesamtaufnahme % Einbau Variante Kontrolle Mitomycin
aH-Thymidin
14C-Uracil
14C-L-Leucin
Frischgewicht szunahme pro 20 Embryonen [mg]
22.4
52.5
170
47.3
65
92 5.0
3.85
these (Tabelle 1), woraus folgt ,dab der Inhibitor unter diesen Bedingungen nicht aufgenommen werden diirf~e. 2. DNS-Synthese in dormanten, entwicMungsbereiten und temperaturblockierten
.4grostemma-githago-Samen Die Samen yon Agrostemma githago zeigen eine eindeutige Abh~ngigkeit ihres Keimungsverhaltens yore Reife- und Nachreifezustand. Reife, aber noch nicht nachgereifte Samen sind dutch eine ,,relative Ruheperiode" (BogRISS 1940) charakterisiert, d.h., sie keimen bei 20 ~ aus. Auch die Keimungsbereitschaft nachgereifter Samen l~Bt sich durch eine geeignete Temperaturbehandlung leicht steuern. Wi~hrend naehgereifte Samen bei 20 ~ nach knrzer Quellungszeit zum Radieuladurchbruch gelangen, ist die Entwicklung bei hSheren Temperaturen (30 ~ vollst/~ndig blockiert (Abb. 3). Bei nachgereiften, aber temperaturblockierten Samen fi~llt die mangelnde Entwicklungsbereitschaft mit einer erheblich verminderten 3It-ThymidinEinbaurate zusammen. Ebenso ist die Entwicklungshemmung fiberalterter Samen mit einer geringeren DNS-Synthese korreliert (vergl. HECKER 1974a, Tabelle 2). Auch bei dormanten Samen, die im Gegensatz zu iiberlagerten TABELLE 4 EINFLUSS VON ABSCIS1NS-~URE (20 ~g m1-1) AUF DIE D N S -, Rl~S- UN]) PROTEII~BIOSYNTHEBE ISOLIERTER I~ACHGEREIFTER A grostemma githago-EMBRYONEN
Inkubationsbedingungen vergl. Tabelle 3 : 6 + 22 ~- 2 (30). Angabe der Abscisins~urewirkung auf die Makromolekiilsynthese: % Hemmung des Einbaus Eingesetzte radioaktiv markierte Vorstufen 3H-Thymidin (5,6 Ci mmo1-1) 3H-Uracil (0,9 Ci mmol-1) laC-L-Leuein (185 mCi mmo1-1)
Hemmung des Einbaus [%] 79 10 12
344
M. H E C K E R
oder temperaturblockierten Samen Proteinsynthesen mit unverminderter Intensit~t betreiben, bleibt der Anstieg der DNS-Synthese in der Quellungsphase aus (Abb. 4). Werden nieht naehgereifte Samen bei 30 ~ angequollen, so sind sie in zweifaeher Hinsieht als blockiert zu betrachten. Dabei kann keine Versts kung der DNS-Synthese-Depression beobachtet werden, so dal] die ffir die Initiation der DNS-Synthese limitierenden Faktoren in dormanten und temperaturbloekierten Embryonen identiseh sein diirften. 3. FAnfluli yon InlflbRoren der DNS-t RNS- und Proteinbiosynthese und yon Abselsinsliure auf den Thymldin-Einbau in isolierten Agrostcmma-Embryonen
U m den EinfluB yon Wirkstoffen auf die DNS-Synthese zu untersuchen, war die Isolation der Embryonen zur Gews einer optimalen Wirkstoffaufnahme erforderlich. Schon wenige Stunden nach der Isolation steigt in nachgereiften Agrostemma-Embryonen der Thymidin-Einbau rapide an. Durch Behandlung isolierter Embryonen mit Actinomycin D oder Cycloheximid wird der Thymidin-Einbau erheblich reduziert (Abb. 5). Mitomycin h e m m t sowohl das Wachstum als auch die DNS-Synthese isolierter Embryohen vollst~ndig. Dabei wird nach l~ngerer Einwirkungsdauer auch die RNSSynthese-Rate stark vermindert, w~hrend der laC-L-Leucin-Einbau in Protein nicht tangiert wird (Tabelle 3). Abscisins~ure erweist sich als aktiver Hemmstoff der DNS-Synthese dormanter und nachgereifter Embryonen. Vergleichsweise wird die Intensiti~t der RNS- oder Proteinsynthese weniger inhibiert (Tabelle 4). Diskussion
)/[it der Wasseraufnahme lufttrockener Agrostemma githago-Samen werden nicht alle Makromolekiilsynthesen gleichzeitig, sondern in geordneter Reihenfolge eingeschaltet. W~hrend unmittelbar nach Quellungsbeginn RNS- und Proteinsynthesen nachgewiesen werden kSnnen, setzt die DI~SSynthese erst in der zweiten H~lfte der Quellungsphase ein (vergl. auch REJMAN und BVCHOWICZ 1971 bei Weizen, HALLA• et al. 1973 bei Roggen). Wir vermuten, dal~ die Initiation der DNS-Synthese yon der Induktion spezifischer Enzyme, d.h. yon einer differentiellen Genaktivierung w~hrend der Quellung abh~ngig ist, da der 3H-Thymidin-Einbau in DNS bereits durch geringere Actinomycin- bzw. Cycloheximid-Konzentrationen gehemmt werden kann (vergl. JAcoB und BovEY 1969, MORu et al. 1972). Zu kli~ren bliebe, ob es sich hierbei um Enzyme fiir die Pri~cursorbildung (ScHwA~z und FITES 1970), u m D/qS-Polymerasen (MOl~Y et al. 1972, PAYEE und BAL 1973) oder u m Proteine handelt, die an der Ausbildung des Initiationskomplexes fiir die Replikation beteiligt sind. Eine klare Abh~ngigkeit der DNS-Synthese-Initiation yon Translationsprozessen wird auch yon anderen Autoren an verschiedenen Objekten postuliert (HIGHFIELD and DEWEY 1972). Der Entwicklungsblock nachgereifter Samen, die unter ungiinstigen Milieu-Bedingungen bei h5heren Temperaturen angequollen wurden, i~ul~ert sich in einer starken Depression der Eiweil~synthese. In iiberlagerten Samen mit stark verminderter Keimungsbereitschaft wurde ebenfalls eine deutliche H e m m u n g der Proteinsynthese gefunden (HncKER 1974a). In beiden F~llen bleibt auch die D!qS-Synthese auf niedrigem l~iveau stehen, obwohl die
REGULATION
DER DNS-SYNTHESE
345
RNS-Synthese nicht beeinflui~t wird. Dieser Befund spricht ebenfalls fiir die Regulation der DNS-Synthese durch Bildung bestimmter Proteine. Die eigentliche Bedeutung der DNS-Synthese ffir die Keimung der Samen ist unseres Wissens noch nicht eindeutig gekl&rt. Die auff&llige und an mehreten Beispielen demonstrierte Beziehung zwischen der Intensifier des 3H-Thymidin-Einbaus und der Entwicklungsbereitschaft der Samen macht eine Abhs der Keimung yon der DNS-Synthese wahrscheinlich. Tats&chlich wird die Keimung der Agrostemma-Samen durch eine Hemmung der DNS-Synthese nach Mitomycin-Applikation verhindert bzw. verzSgert. Das Phytohormon Abscisinss das bei der Aufrechterhaltung der Samenruhe eine Schliisselrolle spielt, hemmt das Wachstum und die Entwicklung nachgereifter Agrostemma-Embryonen. Dabei wird yon den Nucleins~urenund Proteinsynthesen in erster Linie die DNS-Synthese-Rate reduziert (vergl. OVERBECKetal. 1967). In dormanten und nachgereiften Agrostemma-Samen laufen wesentliche Stoffwechselprozesse wie Atmung, RNS- und Proteinsynthese mit gleich hoher Intensit~t (H~c~ER 1974b) ab. Lediglich am Beispiel der Nitratreduktase konnte ein Syntheseblock in nicht nachgereiften Embryonen beschrieben werden (BoRRISS und SCHULZE 1966). Wir konnten nachweisen, dai~ auch die DNS-Synthese-Rate dormanter Samen im Vergleich zu nachgereiften Einheiten auf niedrigem Niveau stehen bleibt. Hierfiir k5nnte die unzureichende Bereitstellung bestimmter Proteine, die fiir die Initiation der DNS-Synthese erforderlich sind, verantwortlich sein. Erst im Verlauf der Nachreife wfirde -- etwa durch Derepression weniger kritischer Gengruppen (vergl. BORRmS und GONTHER 1 9 6 7 ) - - der DNSSyntheseblock aufgehoben. Durch vergleichende Analysen der in quellenden und nachgereiften Samen gebildeten Proteine und durch Einbeziehung yon Schliisselenzymsynthesen sollen diese hypothetischen Vorstellungen iiberpriift werden. Danksa9un9 H e r r n Prof. Dr. H. B o r r i s s u n d H e r r n Prof. Dr. K . - H . K S h l e r b i n ieh fiir wertvolle H i n w e i s e u n d fiir die kritisehe D u r c h s i c h t des M a n u s k r i p t e s z u D a n k verpfliehtet.
Literatur .3~ME~, n . D.: A m o d e l of seed d o r m a n c y . - - B e t . R e v . 34 : 1 - - 3 1 , 1968. BON~ER, J . : T h e Molecular B i o l o g y of D e v e l o p m e n t . - - O x f o r d 1965. BORRISS, H . : U b e r die i n n e r e n V o r g ~ n g e bei der S a m e n k e i m u n g u n d ihre B e e i n f l u s s u n g d u r c h Aul~enfaktoren. - - J a h r b . wiss. B e t . 89 : 2 5 4 - - 3 3 9 , 1940. BORRISS, H . , G~3NTm~R, E.: U n t e r s u e h u n g e n z u r G e n e t i k des k e i m u n g s p h y s i o l o g i s e h e n Verh a l t e n s v o n A n t i r r h i n u m - S a m e n . - - Biol. Zentralbl. 86 : 3 8 7 - - 3 9 9 , 1967. BO~RISS, H . , SCH~ERDE~, B., G I u c , P. H . : Die W i r k u n g y o n P h y t o h o r m o n e n u n d I n h i b i t o r e n a u f die E n z y m a k t i v i t a t e n d o r m a n t e r u n d n a e h g e r e i f t e r A g r o s t e m m a - E m b r y o n e n . - - A b s t r . Syrup. N a t u r a l P l a n t G r o w t h S u b s t . , Libliee 1972. BORRISS, H . , SCHULZE, J . : Di, ~ N i t r a t r e d u k t a s e - A k t i v i t i t der E m b r y o n e n r u h e n d e r u n d n a c h gereifter A g r o s t e m m a - S a m e n . - - Z. P f l a n z e n p h y s i o l . 55 : 4 4 9 - - 4 5 7 , 1966. HALLA~, N. D., ROBERTS, B. E., OSBOrne, D. J. : E m b r y o g e n e s i s a n d g e r m i n a t i o n in r y e (Secals cereals L.). I I I . F i n e s t r u c t u r e a n d b i o c h e m i s t r y of t h e n o n - v i a b l e e m b r y o . - - P l a n t a 110 : 279 to 290, 1973. HECKER, )/[.: U n t e r s u e h u n g e n fiber die P r o t e i n - , I~NS- u n d D N S - S y n t h e s e in g e a l t e r t e n S a m e n v o n A g r o s t e m m a githago L. u n t e r s c h i e d l i e h e r K e i m u n g s b e r e i t s e h a f t . - - Biol. R u n d s c h a u 12 : 2 7 7 - - 2 7 9 , 1974a. HECKER, M.: R N S - S y n t h e s e in d o r m a n t e n u n d n a e h g e r e i f t e n A g r o s t e m m a g i t h a g o - S a m e n - R N S - M e t h y l i e r u n g u n d A f f i n i t ~ t der R N S z u P o l y - ( U ) - F i l t e r s e h e i b e n . - - B i o e h e m . P h y s i o l . P f l a n z e n 155 : 4 6 1 - - 4 6 7 , 1974b.
346
M. H E C K E R
HEOKER, M., HUTH, A.: Untersuchungen fiber die DNA-Synthese in quellenden d o r m a n t e n u n d nachgerefften Agrostemma githago-Embryonen (II.) - - Biochem. Physiol. Pflanzen 1 6 7 : 261--266, 1975. HIGHI~IELD, D. P., DEWEY, W. C. : Inhibition of D N A synthesis in synchronized chinese h a m s t e r cells treated in G1 or early S phase with eycloheximide or puromyein. - - Exp. Cell Res. 75 : 314---320, 1972. ,IAKOB, I~. M., BOVEY, F.: E a r l y nucleic acid a n d protein synthesc a n d mitoses in the primary root tips of germinating Viciafaba. - - Exp. Cell Res. 54 : 118--126, 1969. MANS, R. J., NOVELLI, G. D. : Measurement of the incorporation of radioactive amino acids into protein b y filter paper disk method. - - Arch. Biochem. Biophys. 94 : 48--53, 1961. MORY, Y. Y., CHEN, D., SAhib, S.: Onset of deoxyribonucleic acid synthesis in germinating wheat embryos. - - P l a n t Physiol. 49 : 20---23, 1972. OVERBECK, J. VAlq, LOEFlrLER, J. E., MAkSON, M. J. R.: Dormin (abscisin II), inhibitor of p l a n t D N A synthesis. - - Science 156 : 1497--1499, 1967. PAYEE, J. F., BAL, A. K.: D N A polymerase activity in embryos of Allium cepa seed. - - Phytochemistry 12 : 2613--2616, 1973. REJMAN, E., BuC~owIcz, J.: The sequence of initiation of RNA, D N A a n d protein synthesis in the wheat grains during germination. - - P h y t o c h e m i s t r y 10 : 2951--2957, 1971. SCHWARZ, D. tl., FITES, R. C.: Thymidine kinase from p e a n u t seedlings. - - P h y t o c h e m i s t r y 9 : 1405--1414, 1970. ~r ~:~ECKER (Greifswald): S t u d i u m reflulaee s y n t ~ z y D N A v i n h i b o v a n ~ e h a a k t i v o v a n ~ e h s e m e n e e h . 4 g r o s t e r n r n a g l t h a g o . - - Biol. P l a n t . 17 : 3 3 9 - - 346, 1975.
Byl studov~n v z t a h mezi synt6zou DNA a kliSivosti semen Agrostemma githago. Synt6za bilkovin a R N A je aktivovhna od sam6ho poSg~tku bub~enl, kde~.to synt6za D N A zaSinh v drnh~ 5hsti fs bub~enl. Semcna Agrostemma inhibovan~ vyfiw teplotou (30 ~ nebo star~i semena s nizkou kliSivosti jsou charakterizovhna v:~razn~ sni~cnou synt6zou bilkovin. Synt6za DNA je r o v n ~ snf~en~. Inhibice synt6zy bflkovin u embryi Agrostemma, n a n~i~ byl aplikovs cykloheximid nebo aktinomycin D, vyvolgwg~ sni~enl synt6zy DNA. Tyro vSrsledky naznaSuji, ~.e po5~tek synt6zy DNA u bubHclch semen Agrostemma z~visi n a synt6ze specigdnieh bflkovin. Kyselina abscisov~ inhibuje jak rfist, t a k i synt6zu DNA izolovan~rch embryf Agrostemma. Mitomycin brzdi synt6zu DI~A v t~m~ rozsahu. U dormantnlch semen s nesni~enou intenzitou synt6zy bflkovin je inkorporaco 3H-tymidinu do DNA tak6 sn/~ena. Podle autorfi je synt6za D N A v bub~ielch semenech souShsti pochodd, kter~ prohihajl po dozrgmi semen Agrostemma.