20. Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft für Pädiatrische Stoffwechselstörungen

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Abstracts Monatsschr Kinderheilkd 2006 · 154:603–618 DOI 10.1007/s00112-006-1343-2 © Springer Medizin Verlag 2006

20. Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft für Pädiatrische Stoffwechselstörungen Cholesterin – zwischen Mangel und Überfluss Organisation: Dipl.- Biochem. Irmgard Starke, Uniklinikum AöR Magdeburg, Zentrum für Kinderheilkunde und PD Dr. Klaus Mohnike, Uniklinikum AöR Magdeburg, Zentrum für Kinderheilkunde

H1 Biochemistry and Molecular Biology of Cholesterol Biosynthesis HR Waterham Laboratory Genetic Metabolic Diseases, Departments of Clinical Chemistry and Pediatrics, Academic Medical Center, Amsterdam, The Netherlands For many decades, cholesterol has been considered an important structural component of cellular membranes and myelin, and precursor of steroid hormones and bile acids. Moreover, the recognition that high cholesterol levels (hypercholesterolemia) are a major risk factor for the development of heart disease and atherosclerosis has gained enormous attention not only in medicine, medical and pharmacological research but also from the general public. The discovery of a crucial role of cholesterol in human embryogenesis and the recent identification of a number of inherited disorders of cholesterol biosynthesis show that also low cholesterol levels (hypocholesterolemia) may have severe consequences for human health and development. Cholesterol is a major end product of the isoprenoid biosynthetic pathway, which, starting from acetyl-CoA, produces numerous biomolecules with pivotal functions in a variety of cellular processes, including cell growth and differentiation, protein glycosylation and signal transduction. In the past 8 years, seven distinct inherited disorders have been linked to different enzyme defects in the isoprenoid/cholesterol biosynthesis pathway by the finding of abnormally increased levels of intermediate metabolites in patients followed by the demonstration of disease-causing mutations in genes encoding the implicated enzymes. The majority of the genes encoding the enzymes involved in postsqualene cholesterol biosynthesis, have been identified as a corollary of the identification and elucidation of the biochemical and molecular basis of these defects. Although originally the enzymes involved in isoprenoid biosynthesis had been reported to be located in the cytosol or the endoplasmic reticulum, a series of reports have claimed that many of the enzymes (or the reactions they catalyze) are partly, mainly, or even exclusively located in peroxisomes. This has led to the rather generally accepted view that peroxisomes would be directly involved in isoprenoid and cholesterol biosynthesis. However, reinvestigation of the subcellular localization under physiological conditions and after overexpression of three human isoprenoid biosynthetic enzymes, previously claimed to be predominantly pero-

xisomal, using a variety of biochemical and microscopical techniques unambiguously pointed to an exclusive cytosolic localization of these enzymes with no indication of even a partial peroxisomal localization.

H2 Low Maternal Cholesterol Associated with Preterm Birth And Growth Restriction: An Early Mechanism Impairing Fetal Development? M Muenke1, R Edison1, K Berg1,R Long1, R Kelley2, C Rotimi3,A Remaley4, R Stevenson5 1Medical Genetics Branch, National Human Genome Research, Institute, National Institutes of Health (NIH), Bethesda 2Kennedy Krieger Institute, Baltimore 3Howard University, Washington, DC 4NIH Clinical Center, Bethesda 5Greenwood Genetic Center, Greenwood, SC. The multiple roles of cholesterol in early embryonic development have been well-established. Sufficient cholesterol is required to maintain the rapid early expansion of neural, cardiac, and vascular tissues, and is believed to modulate the activity of Hedgehog morphogenetic pathways. We have investigated whether low maternal serum cholesterol predicts adverse pregnancy outcomes in a large, population-based cohort maintained by the Greenwood Genetic Center (GGC). The GGC banks all sera drawn for the mid-gestational triple-screen from consenting women presenting to clinics in a large region of South Carolina. We assayed total serum cholesterol from approximately 10,000 consecutively registered women, and adjusted the cholesterol values for gestational week the sample was obtained. Clinical follow-up was sought for all mothers with adjusted cholesterol values in the lowest 15 of the cohort, along with an equal number of randomly selected mothers drawn from the remainder of the cohort. Follow-up data were available for 2675 infants after exclusion of 1081 cases for factors known to adversely affect gestation, or who were lost to follow-up. Available neonatal data included gestational age at delivery, gender of infant, weight, length, OFC, and identified congenital anomalies. Median maternal serum cholesterol was 203 mg/dl; the lowest 5 had values <= 138 mg/dl. Median maternal age was 24 years, with 21 13-19 Monatsschrift Kinderheilkunde 6 · 2006

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Abstracts years of age and 4>= 35 years. Median gestational week at delivery was 39; 8 were born at <37 weeks gestation. One chief finding of this study was that independent of maternal demographics, mothers with cholesterol values in the lowest 5 of the cohort gave birth to infants <37 weeks gestation at 1.7 times the rate of mothers with higher cholesterol values (p=.02). If a lower cutoff value (e.g. 3, or maternal cholesterol <= 132 mg/dl) was used to define „very low cholesterol mothers,“ the estimated relative risk (RR) for preterm birth was greater (RR=2, p=.002). Further, when preterm birth was defined as births between 28-35 weeks gestation and term birth as weeks 3842, the relative risk of early birth due to very low maternal cholesterol was higher still (RR=2.4, p=.004). This is an apparent „dose-response“ effect, whereby the lower the maternal cholesterol and the earlier the gestational ages of delivery, the stronger was the observed association between low maternal cholesterol and prematurity. Such an effect strengthens the likelihood that there is a direct biological mechanism linking very low maternal cholesterol to the pathogenesis of preterm delivery. The second result was the pattern of intrauterine growth restriction (IUGR) observed in association with low cholesterol in this cohort, which suggests a mechanism specific to early gestation. We observed elevated risks for global IUGR (< 10th for age on all three growth measurements) among the low cholesterol pregnancies (RR=2.3, p=.02); this elevation was more pronounced among preterm than among term births. Global IUGR has been attributed to inadequate periconceptional nutrition or defects in placentation which impair growth from the beginning of pregnancy. Inadequate levels of maternal cholesterol in early gestation may thus set in motion processes leading to preterm delivery and/or growth restriction via at least two mechanisms, insufficiency of progesterone in early gestation, and insufficient transport of cholesterol to the embryo to optimize critical developmental processes. Similar mechanisms may account for reports of preterm, growth-restricted infants exposed to cholesterol-lowering statin drugs in early gestation (Edison and Muenke, 2004b. AJMG 131A:287-298).

H3 Defekte der Cholesterolbiosynthese – ein Überblick D Haas Universitätsklinikum für Kinder- und Jugendmedizin, Heidelberg Cholesterol spielt eine wesentliche Rolle in vielen zellulären Prozessen und in der embryonalen Entwicklung. Zusätzlich zu seiner Funktion als Strukturlipid in Zellmembranen und Myelin dient Cholesterol als Vorläufer für Gallensäuren, Steroidhormone, Neurosteroide und Oxysterole. Entscheidende Bedeutung hat Cholesterol für die Funktion von sogenannten Rafts oder Caveolae, Membranmikrodomänen, die eine Transport- und Sequestrationsfunktion haben. Außerdem wird Cholesterol für die Modifikation und Signalübertragung verschiedener Hedgehog-Proteine benötigt, die die Embryonalentwicklung steuern. Cholesterol besteht aus 27 Kohlenstoffatomen und wird in etwa 30 chemischen Reaktionen aus Lanosterol, dem ersten Sterol im Syntheseweg, synthetisiert. Die meisten der bislang beschriebenen Defekte der Cholesterolbiosynthese liegen distal des Squalens. Nur die Mevalonazidurie und das Hyperimmunglobulinämie-D-Syndrom, die beide auf einem Defekt der Mevalonatkinase beruhen, sind im proximalen Teil des Synthesewegs lokalisiert. Leitsymptom sind rezidivierende Fieberschübe, die im Falle der Mevalonazidurie noch mit Fehlbildungen und einem variablen Bild neurologischer Symptome einhergehen. Das Smith-Lemli-Opitz Syndrom, die Lathosterolämie und die Desmosterolämie sind durch Gesichtsdysmorphien, angeborene Fehlbildungen der Extremitäten, des ZNS und der inneren Organe gekennzeichnet. Das Conradi-Hünermann Syndrom (CDPX2) und das CHILD-Syndrom sind X-chromosomal dominant vererbte Störungen, die mit Skelettauffälligkeiten und ichthiösen Hautveränderungen einhergehen. Im Falle des CHILD-Syndroms sind diese typischerweise auf eine Körperhälfte beschränkt. Mutationen im Lamin-B-Rezeptor sind ursächlich

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sowohl für die Greenberg-Dysplasie, ein bereits intrauterin letales Fehlbildungssyndrom mit Hydrops fetalis, Skelettdysplasie und abnormen Verkalkungen knorpeliger Strukturen, ebenso wie für die Pelger-HuëtAnomalie, die eine benigne hämatologische Auffälligkeit darstellt. Möglicherweise liegt auch bei einigen Patienten mit Antley-Bixler-Syndrom eine Störung der Cholesterolbiosynthese zugrunde. Zusammenfassend zeigen Patienten mit Cholesterolbiosynthesedefekten ein breites klinisches Spektrum, was von multiplen Fehlbildungen dominiert wird. Zusätzlich liegen häufig faziale Dysmorphien und Hautauffälligkeiten vor.

H4 Smith-Lemli-Opitz Syndrom – Von der Diagnose zur Therapie P Jira, L Sutherland, F Zijlstra, J Smeitink , R Wevers Nijmegen, The Netherlands Smith-Lemli-Opitz-Syndrom (SLOS) ist eine relativ häufige autosomalrezessive Entwicklungsstörung, die durch eine faziale Dysmorphie, mentale und motorische Retardierung sowie verschiedene Fehlbildungen charakterisiert ist. Ursächlich liegt eine reduzierte Aktivität des Cholesterolbiosyntheseenzyms 7-Dehydrocholesterolreduktase (7DHCR) zugrunde, die Folge von Mutationen des kodierenden DHCR7-Gens ist. Daher weisen Patienten niedrige Cholesterol- und erhöhte 7-Dehydrocholesterolkonzentrationen in Plasma und Geweben auf, die relativ gut mit dem klinischen Schweregrad korrelieren. Wir untersuchten in vitro den Effekt von Simvastatin auf die 7DHCRExpression und Aktivität in primären Hautfibroblastenkulturen von Patienten. Die in vitro Studien zeigten, dass Simvastatin die Gentranskription des DHCR7-Gens induziert. Daraus resultiert eine Erhöhung des 7DHCR-Proteingehaltes und entsprechend eine Erhöhung der 7DHC- Restaktivität. Da 7DHCR den begrenzenden Schritt bei SLOS katalysiert, führt eine Erhöhung der 7DHCR-Restaktivität zu einer erhöhten Rate der Cholesterolbiosynthese mit verminderten 7-Dehydrocholesterol- und erhöhten Cholesterolkonzentrationen, wie es bei behandelten Patienten beobachtet wird. In der Nijmegen International SLO Simvastatin (NISLOS) Studie werden SLOS-Patienten mit Simvastatin, einem oralen HMG-CoA-Reduktasehemmer mit/ ohne Cholesterol Supplementation behandelt, um die Wirkung und Wirksamkeit dieser Behandlung auf die Entwicklung und den allgemeinen Gesundheitszustand zu untersuchen. Die Patienten vertrugen die Simvastatintherapie gut und ohne klinische Nebenwirkungen. Während der Behandlung konnten wir eine deutliche Verminderung der 7- und 8-DHC-Konzentrationen in Plasma und Liquor und eine damit verbunden einen Anstieg des Plasmacholesterols bei der Mehrheit der Patienten nachweisen. Insgesamt zeigten SLOS-Patienten eine befriedigende bis gute klinische Beeinflussung von Wachstum und Entwicklung wie an Hand der vorläufigen Daten dargestellt wird. Simvastatinbehandlung mit oder ohne Cholesterolsubstitution stellt eine wirksame Option in der Langzeitbehandlung der SLOS-Patienten mit Restaktivität der 7DHCR und milden bis moderaten klinischen Ausprägung.

H5 Gallensäurensynthesedefekte – eine wichtige Gruppe speziﬁsch behandelbarer Stoﬀwechselerkrankungen GF Hoﬀmann, H Gan-Schreier, D Haas Universitätsklinik für Kinder- und Jugendmedizin Heidelberg Gallensäuren werden in der Leber aus Cholesterol gebildet; der erste Schritt (7α-Hydroxylase) ist geschwindigkeitsbestimmend, zum Teil erfolgt die Synthese über die peroxisomale Betaoxidation. Die beiden primären Gallensäuren, Cholsäure und Chenodesoxycholsäure, werden zu CoA-Estern aktiviert, mit Glycin oder Taurin zu Gallensalzen konjugiert und mit der Gallenflüssigkeit ausgeschieden. Gallensäuren

sind für die enterale Lipidresorption unerläßlich, regulieren die hepatische Cholesterolsynthese (Hemmung der HMG-CoA-Reductase) und sind für die Bildung der Gallenflüssigkeit wichtig. Gallensäurensynthesedefekte sind eine seltene, aber wichtige Differentialdiagnose hepatologischer und neurologischer Erkrankungen. Die Mehrzahl der Störungen ist bei rechtzeitiger Diagnose mittels Substitution von Gallensäuren gut behandelbar. Undiagnostiziert führen sie zu irreversiblen Schäden oder zum Tod. Der 3β-Hydroxy-Δ5-C27Steroid-Dehydrogenase-Mangel, der Δ4-3-Oxosteroid-5β-ReduktaseMangel, sowie der Oxysterol-7α-Hydroxylase-Mangel manifestieren sich im frühen Säuglingsalter mit cholestatischer Hepatopathie, Steatorrhoe und Malabsorption fettlöslicher Vitamine. Ein Mangel an den primären Gallensäuren Cholsäure und Chenodeoxycholsäure sowie die Akkumulation abnormer Gallensäuren hemmen die kanalikuläre Gallensalzpumpe, es kommt zur Cholestase und zu einem Anstieg des konjugierten Bilirubins. Die Anhäufung der abnormen Gallensäuren führt zu einer toxischen Schädigung der Hepatozyten. Wichtigste Differentialdiagnose ist die progressive familiäre intrahepatische Cholestase. Im Gegensatz zu anderen cholestatischen Erkrankungen sind die Gesamtgallensäuren bei Gallensäurensynthesedefekte normal oder nur leicht erhöht. Da die Gallensäuren nicht in die Gallenkanälchen exportiert werden, bleibt auch die gamma-GT normal. Bei der cerebrotendinösen Xanthomatose findet sich bei manchen Patienten im Säuglingsalter eine transiente Hepatitis, im Schulalter können Durchfälle und eine Katarakt dazukommen. Häufig manifestiert sie sich erst im Jugendlichen- oder jungen Erwachsenenalter mit progredienter Ataxie, Demenz, Xanthomen sowie Arteriosklerose. Auch in der differentialdiagnostischen Abklärung peroxisomaler Erkankungen kann der Nachweis abnormer Gallensäure-Derivate die Diagnose ermöglichen, so insbesondere bei den Peroxisomen-Biogenesedefekten. Beim α-Methylacyl-CoA-Racemasemangel ergeben die Bestimmung der überlangkettigen Fettsäuren im Serum sowie der Plasmalogene in Erythrozyten Normalwerte, wohingegen spezifische Gallensäuren sowie die Pristansäure in Galle, Serum und Urin erhöht sind. Bei Patienten mit α-Methyl-Acyl-CoA-Racemase-Mangel sind sensomotorische Neuropathien und eine Retinitis pigmentosa beschrieben. Die spezifische Differenzierung der Gallensäuren mittels ESI-TandemMS nach Festphasen-Extraktion erlaubt eine frühzeitige Diagnosestellung all dieser Defekte. Die Behandlung mit Gallensäuren kann die Prognose fast aller Erkrankungen entscheidend verbessern. Diese spezifische Analytik sollte v.a. großzügig in der Abklärung cholestatischer Lebererkrankungen eingesetzt werden. Sie hat weiterhin ihren Stellenwert bei der Abklärung progredienter neurologischer Erkrankungen und sensomotorischer Neuropathien sowie in der vertiefenden Diagnostik bei Verdacht auf peroxisomale Erkrankungen.

F1 Nachweis des veränderten Steroidstoﬀwechsels unter Simvastatin bei Smith-Lemli-Opitz-(SLO) Syndrom S Pötzsch2, K Mohnike1, MF Hartmann4, I Starke1, PE Jira3, S Wudy4, Klinik für Allg. Päd. u. Neonatol.1, O.-v.-G.-Univ. Magdeburg, Fehlbildungsmonitoring S.-A.2, Zentrum für Kinderheilkunde Steroidlabor, J.v.Liebig-Univ. Giessen4, Univ. Med. Centre Nijmegen3, NL; Bei SLO handelt es sich um ein komplexes metabolisches Fehlbildungssyndrom mit einer verminderten Cholesterolsynthese. Shackleton wies erstmals veränderte Metabolite der adrenalen Steroide [Δ7- und Δ8-Pregnantriol (PT)] bei SLO nach. Das Statin Simvastatin (SV) führt bei SLO-Pat. mit 7-DHCR-Restaktivität zum Anstieg von Chol. im Plasma und zur Reduktion der Präkursoren 7- und 8-DHC. I.R.d. Nijmegen International SLO Simvastatin Studie wurde der Einfluß von SV auf d. adrenalen Steroide untersucht. Untersuchung des Steroidprofils im Urin von 14 SLO-Pat. (3 Mon. - 17,5 J.) (GC/MS) (Spontan- und Sammelurine). Messung mehrerer Metabolite des Kortisols und die [Δ7- und Δ8-] PT-Derivate.

Pat. (n=4) mit mittelschwerem SLOS wiesen verminderte adrenale Metabolite im SU auf. Der Quotient (Δ7+Δ8PT)/PT lag ohne SV bei 2,76 (0,41–12,45) und unter SV bei 0,67 (0,10–2,76). Die Quotienten (Δ7+Δ8PT)/PT (SU) und (7+8DHC)/Chol. (Plasma) zeigen eine gute Korrelation (r2=0,92). Bei SLO-Pat. bestehen Hinweise für eine red. Sekretion von Kortisol/metaboliten. Unter SV-Ther. sollten Pat. hinsichtlich einer mögl. NNRInsuff. überwacht werden. (Δ7+Δ8 PT)/PT im SU ist als nicht-invasiver Parameter für Diagnostik/Therapieverlauf geeignet.

F2 Heterozygotie für die Gly290Asp Mutation des Sonic-Hedgehog-Gensverursacht ein dem Smith-Lemli-Opitz (SLO)-Syndrom ähnliches Fehlbildungssyndrom J Weigel, J Charisius, H Stobbe , A Merkenschlager, R Pfäﬄe Universitätskinderklinik Leipzig Sonic Hedgehog (SHH) spielt während der frühen embryonalen Entwicklung verschiedener Organsysteme eine wichtige Rolle. Hedgehog Proteine werden an Cholesterol konjugiert und damit aktiviert. Ein dystropher, entwicklungsretardierter 9 Monate alter Säugling kam zum Verschluss einer medianen Gaumenspalte. Klinische Kontrollen zeigten eine spastische Tetraparese, einen Kleinwuchs sowie im MRT eine lobäre Holoprosenzephalie (HPE). Der Patient weist eine heterozygote Mutation im SHH-Gen auf, welche Glycin in Position 290 durch Asparagin ersetzt. Glycin290 liegt innerhalb der cholesterolbindenden Domäne des SHH-Proteins. Die bei dem Patienten beobachteten Symptome weisen Gemeinsamkeiten mit dem SLO-Syndrom auf: Syndaktylie der 2. und 3. Zehe, mentale Retardierung, Kleinwuchs, Gaumenspalte und HPE. Diese Mutation wurde zuvor bei einer Patientin mit HPE und ähnlichen klinischen Auffälligkeiten beschrieben*. Dies unterstreicht die Pathogenität dieser Mutation und suggeriert einen SLO ähnlichen Phänotyp bei Mutationen innerhalb der cholesterolbindenden Domäne. Literatur: * Nanni L et al. Hum Mol Genet. 1999 Dec;8(13):2479-88.

F3 Identiﬁkation und funktionelle Charakterisierung neuer Cholesterin-regulierender Faktoren H Runz1,2, D Gilbert3, U Wirkner2, H Erﬂe2, S Wiemann4, J Zschocke1, R Pepperkok2 1 Institut für Humangenetik, Universität Heidelberg 2 Cell Biology/Biophysics Programme, European Molecular, Biological Laboratories 3 Zoologisches Institut, Universität Heidelberg 4 Deutsches Krebsforschungszentrum (DKFZ), Heidelberg Hypercholesterinämie ist ein bedeutender Risikofaktor für die Entstehung von Arteriosklerose und Koronarer Herzkrankheit. Neben Umweltfaktoren spielen genetische Komponenten eine pathophysiologisch entscheidende Rolle. Zur Identifikation neuer Hypercholesterinämie-prädisponierender Gene beschreiben wir hier einen neuartigen experimentellen Ansatz, der durch eine kombinierte Verwendung von Genexpressions- und mikroskop-basierten funktionellen Screening-Experimenten die systematische Identifikation neuer Kandidatengene ermöglicht, die durch Cholesterin und Fettsäuren reguliert werden und die selbst an der Aufrechterhaltung des zellulären Cholesterinhaushalts beteiligt sind. Im Zentrum des experimentellen Vorgehens steht die Verwendung mikroskopischer cDNA- und RNAi-basierender funktioneller Zellarrays, eine Hochdurchsatzmikroskopie-Plattform, sowie eine neuentwickelte automatisierte Bildverarbeitungs-Software. Unser Vorgehen erlaubt gain-offunction und loss-of-function Studien mit hohem Durchsatz. Durch unsere Studie erhoffen wir, ein umfassenderes Verständnis der molekularen Grundlagen der zellulären Cholesterinregulation zu erlangen. Monatsschrift Kinderheilkunde 6 · 2006

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Abstracts F4 Congenital Disorder of Glycosylation Ia: Ein Mausmodell C Thiel, J Rindermann1, T Lübke1, G Matthijs2, K von Figura1 und C Körner Kinderklinik Heidelberg, Abteilung I, Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg 1Biochemie II, Georg-August-Universität Göttingen; 2Center for Human Genetics, University of Leuven, Belgium Angeborene Defekte, die die Synthese oder die Prozessierung von Zuckerstrukturen von Glykoproteinen betreffen, führen beim Menschen zu `Congenital Disorders of Glycosylation´ (CDG). Hierbei stellt CDG-Ia den häufigsten CDG-Typ unter den bisher beschriebenen 19 verschiedenen Erkrankungen in diesem Stoffwechselweg dar. Das klinische Bild von CDG-Ia-Patienten ist durch geistige und körperliche Behinderung sowie Muskelschwäche, Störungen im Leberstoffwechsel, Blutgerinnungsproblemen und Herzfunktionsstörungen, Ataxie, Gedeih- und Entwicklungsverzögerungen geprägt. Biochemisch konnte die verminderte Aktivität des Enzyms Phosphomannomutase 2 (PMM2) als Ursache für CDG-Ia identifiziert werden. Beim Ausschalten des Pmm2-Gens in der Maus zeigte sich eine embryonale Letalität zwischen Tag 2,5 und 3,5. Außerdem war die Weitergabe des maternalen Pmm2-Null-Allels bei heterozygoten Tieren stark vermindert. Erste Ergebnisse von Cre-/loxP Mäusen, die homozygot für eine der häufigsten Mutationen von CDG-Ia-Patienten sind, weisen leichte Wachstumsverzögerungen sowie morphologische Veränderungen des Kopfes, des Fells und der Wirbelsäule auf.

H6 1H-Magnetresonanz-Spektroskopie als innovative Methode zur Erfassung von Stoﬀwechselvorgängen in vivo S Vielhaber, H Niessen, J Kaufmann Universitätsklinikum Magdeburg, Klinik für Neurologie II, Leipziger Str. 44, 39120 Magdeburg Die 1H-Magnetresonanz-Spektroskopie ermöglicht es, Stoffwechselprodukte („Surrogatmarker“) nichtinvasiv zu bestimmen und damit Stoffwechselvorgänge in vivo zu beobachten. Der auffälligste Peak im Spektrum stammt von der Aminosäure N-Acetylaspartat (NAA). NAA ist im reifen Gehirn fast ausschließlich in den Neuronen vorhanden und Marker sowohl neuronaler Funktion als auch Dichte. Eine Reduktion des NAA-Peak ist ein pathogenetisch mehrdeutiger Ausdruck neuroaxonaler Schädigung. Zweitgrößter Peak beim Gesunden ist der Creatin-Peak (Cr), der häufig als interner Standard verwendet wird, da er als relativ stabil gilt. Der Cholin-Peak (Cho) ist Indikator für den Membranumsatz, der sowohl bei Zellproliferation als auch bei Abbauprozessen gesteigert ist. Pathologisch vermehrte Lactatresonanzen treten bei Störungen der oxidativen Energiegewinnung auf. Untersuchungen mit kurzer Echozeit ermöglichen die Darstellung zusätzlicher Metabolite z.B. von Lipidresonanzen und Myo-Inositol. Es soll anhand von Fallbeispielen, klinisch-experimentellen Studien und Tiermodellen die Methode der 1H-MR-Spektroskopie sowie ihre Anwendung und Grenzen in der klinischen Diagnostik und dem Therapiemonitoring neurometabolischer Erkrankungen, zerebraler Anfallsleiden und Systemdegenerationen dargestellt werden.

H7 Upstream from cholesterol C Shackleton Children‘s Hospital & Research Center Oakland In the steroid/sterol field decades of studies have been into the disorders of steroid synthesis and metabolism, all “downstream” of the precursor cholesterol. This changed in the 1990s with the description of the cause of Smith-Lemli-Opitz syndrome (SLOS), namely 7-dehydrosterol-Δ7-reductase (DHCR7) deficiency. Since then 6 other disorders

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upstream of cholesterol have been characterised namely desmosterolosis (Δ24-reductase mutations); lathosterolosis (sterol C5-desaturase mutations); CHILD syndrome (NSDHL, NADH steroid dehydrogenase-like, or Δ8-Δ7 isomerase mutations); CDPX2 (X-linked dominant chondrodysplasia punctata, Δ8-Δ7 isomerase mutations); Greenberg skeletal dysplasia (sterol-Δ14-reductase mutations) and Antley-Bixler syndrome (ABS, attenuated activity of lanosterol 14-demethylase). Whether the phenotype of these disorders is a result of cholesterol deficiency or toxic effects of the cholesterol precursors produced in excess is still not known. Naturally, disorders of cholesterol synthesis have an impact on the production of all compounds that rely on cholesterol as the primary precursor, viz steroid hormones, oxysterols and bile acids. Our studies have focussed on the influence of SLOS and ABS on steroid production. In the former case DHCR7 deficiency results in the production of a secondary series of adrenal and gonadal steroids with additional unsaturation in the Δ7 or Δ8 positions. When measured in urine these can be used to diagnose the condition both in children and prenatally. Neurosteroid production is also compromised in the condition with likely reduction in synthesis of conventional compounds and the production of novel neurosteroids of unknown potency. This may impact the retardation and behavioral problems seen in the disorder Several recent reviews have listed the skeletal-abnormality AntleyBixler syndrome among the disorders upstream of cholesterol. Mainly this arose from the facts that the antifungal drug fluconazole given in pregnancy results in the skeletal phenotype of ABS, and findings of elevated lanosterol in cultured lymphoblasts from affected patients. It is known that fluconazole inhibits lanosterol 14-demethylase so it was hypothesized that this enzyme was mutated in the condition. However, no mutations were found in patients with the condition. The disorder has finally been traced to P450 oxidoreductase deficiency which affects many steroid biosynthetic enzymes including lanosterol demethylase. This presentation primarily focuses on our recent studies on steroid metabolism in SLOS and ABS

H8 Spektrum des Adrenogenitalen Syndroms – vom Cholesterin zum Steroidhormon CE Flück Pädiatrische Endokrinologie und Diabetologie, Medizinische Universitäts-Kinderklinik Bern, Schweiz; Cholesterin ist essentiell zur Herstellung von Steroidhormonen. Die menschlichen Nebennieren, Gonaden, Plazenta und das Gehirn besitzen die Enzymausstattung, aus Cholesterin Steroidhormone zu synthetisieren. Patienten mit Störungen der Steroidhormonbiosynthese sind seit Mitte des letzten Jahrhunderts in der medizinischen Literatur klinisch als Adrenogenitales Syndrom (AGS) beschrieben. Es folgten biochemische Analysen und schliesslich die Beschreibung der verschiedenen Gendefekte mit den dazugehörigen AGS Formen. Während der 21-Hydroxylase-Mangel die häufigste AGS Form in Westeuropa darstellt, kennen Bevölkerungsgruppen im Mittleren Osten den 11β-Hydroxylase Mangel und die Japaner den StAR Mangel als ihre häufigste AGS Form. Die neuste AGS Form stellt der P450 Oxidoreduktase (POR) Mangel dar. POR ist der obligate Elektronendonor für alle Typ 2 P450er Enzyme. In den Nebennieren oder Gonaden sind dies P450c17, c19 und c21. Patienten mit POR Mutationen zeigen ein Steroidprofil, das eine kombinierte Minderaktivität dieser Enzyme vermuten lässt. Klinisch findet man ein breites Spektrum von Patienten mit Knochenanomalien (Antley Bixler Syndrom) und genitalen Missbildungen bis hin zum PCOS ähnlichen Phänotyp.

F5 Quantiﬁzierung von 17-OH-Progesteron (17-OHP) durch HPLC-MS/MS M Peter, N Janzen, J Sander Screening Labor Hannover, Postfach 91 10 09, 30430 Hannover In der Kinder-Richtlinie wird die immunometrische Bestimmung von 17-OHP als Standardmethode definiert. Sie führt häufig zu falsch positiven Ergebnissen. Wir entwickelten eine HPLC-MS/MS-Methode, um Steroidhormone im Trockenblut zu messen. Ein Spot (∅ 6mm, ca. 12,5 μl Vollblut) wird mit Acetonitril/Aceton (1:1) eluiert. Laufzeit: 6,5 min/Probe; Säule: Atlantis™ 2,1x20 mm (Waters); Gradientenfluss: 30 mM Ameisensäure, Methanol; Quantifizierung: über eine Kalibratorreihe (Steroide in unterschiedlichen Konzentrationen); interne Standards: d2-Cortisol und d8-17OHP. Wir untersuchten ca. 10.000 Proben aus dem Neugeborenen-Screening (normale Ergebnisse bzw. Überschreitung des für das Gestationsalter spezifischen Cut-off im FIA). 17-OHP-Werte gemessen durch MS/MS sind niedriger. Bei den Proben, die im Immunoassay (Delfia 17-OHP neonatal) den Cut-off überschritten hatten, fanden sich hohe Konzentrationen an Cortisol und/oder 11-Desoxycortisol bei normalem 17-OHP. Damit konnten die Ergebnisse des Immunoassays als falsch positiv erkannt und ein 21-Hydroxylase-Mangel ausgeschlossen werden. In Proben von Neugeborenen mit 21-Hydroxylase-Mangel waren 17-OHP und 21-Desoxycortisol erhöht, während Cortisol inadäquat niedrig war. Der Vorteil der MS/MS Methode ist die Schnelligkeit bei hoher Sensitivität und Spezifität sowie geringer Bedarf an Probenmaterial. Der Einsatz dieser Methode im Massenscreening ist eingeschränkt auf die nachträgliche Aufarbeitung von Proben, die im Immunoassay erhöhte Werte hatten.

F6 Biochemische Charakterisierung der humanen 3-Methylglutaconyl-CoA-Hydratase und Untersuchungen zur Entstehung der 3-Hydroxyglutarsäure bei Glutarazidurie Typ I V Peters1, M Mack2, U Schniegler-Mattox2, M Liesert3, S Kölker1, W Buckel3, GF Hoﬀmann1, J Zschocke4 1 Universitätsklinik für Kinder- und Jugendheilkunde Heidelberg, 2 Institut für Technische Mikrobiologie der Hochschule Mannheim 3 Labor für Mikrobiologie der Philipps-Universität Marburg 4 Institut für Humangenetik, Universitätsklinik Heidelberg Die 3-Methylglutaconacidurie Typ I (MGA1) wird durch einen Defekt der 3-Methylglutaconyl-CoA-Hydratase verursacht. Vorangehende Untersuchungen konnten zeigen, dass die MGA1 durch Mutationen im menschlichen AUH-Gen („AU binding homolog of enoyl-CoA hydratase“) verursacht wird. Ziel unserer Untersuchungen war es, das gereinigte Genprodukt der AUH biochemisch zu charakterisieren. Die kinetischen Untersuchungen zeigten, wie erwartet, eine hohe Aktivität des Enzyms für die reversible Umsetzung von 3-Methylglutaconyl-CoA zu 3-Hydroxy-3-Methylglutaryl-CoA (Km = 8,3 μM). Auch für die Umwandlung von Glutaconyl-CoA zu 3-Hydroxyglutaryl-CoA (Km = 2,4 μM) fanden wir eine hohe Aktivität. Um zu untersuchen, ob diese Reaktion für die Entstehung der 3-Hydroxyglutarsäure bei der Glutarazidurie Typ I eine zentrale Rolle spielt, führten wir Aktivitätsanalysen mit der humanen mittelkettigen Acyl-CoA-Dehydrogenase (MCAD) durch. Das Enzym war in der Lage, Glutaryl-CoA zu Glutaconyl-CoA zu oxidieren, jedoch mit einer geringeren Rate als der Umsatz des physiologische Substrats Octanoyl-CoA (0,4 der Oxidationsrate von Octanoyl-CoA; Km = 0,56 mM). Bei pathophysiologisch hohen intrazellulären Glutaryl-CoA-Konzentrationen ist dennoch ein relevanter Umsatz zu erwarten. Die nachfolgende Hydratisierung zu 3-Hydroxyglutarsäure wird durch die 3-Methylglutaconyl-CoA-Hydratase katalysiert. Die enzymatischen Befunde

unterstützen die Annahme, dass die wesentliche Funktion der 3-Methylglutaconyl-CoA-Hydratase im Leucinstoffwechsel liegt. Darüber hinaus erklären die Befunde die Entstehung der 3-Hydroxyglutarsäure in kleinen, relativ konstanten Konzentrationen bei der Glutarazidurie Typ I.

F7 Verteilung 3H-markierter 3-Hydroxyglutarsäure im Mausmodell der Glutarazidurie Typ I C Mühlhausen Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf, Klinik und Poliklinik für Kinder- und Jugendmedizin, Martinistrasse 52, 20246 Hamburg, Bei der Glutarazidurie Typ 1 (GA1) kommt es durch den Defekt des Enzyms Glutaryl-CoA-Dehydrogenase (GCDH) getriggert durch katabole Krisen zur spezifischen Erhöhung von 3-Hydroxyglutarsäure (3OHGA) in Blut und Organen mit nachfolgender striataler Neurodegeneration. Parallel sind bei Patienten subdurale Hämatome zu beobachten. Eigene Untersuchungen haben gezeigt, dass 3OHGA in vitro und in vivo zu einer Störung der Integrität von Endothelbarrieren führt. Es ist unklar, ob 3OHGA aus der systemischen Zirkulation die Blut-Hirnschranke regional überwinden kann und seine neurotoxische Wirkung entfalten kann, oder ob die von Hirnzellen produzierte 3OHGA-Menge ausreichend ist. Es steht ein Mausmodell der Glutarazidurie Typ I zur Verfügung (GCDH -/-), das erhöhte 3OHGA-Spiegel aufweist, aber unter basalen Bedingungen keine encephalopathischen Krisen entwickelt. Um die Fähigkeit zirkulierender 3OHGA zur Überwindung endothelialer Barrieren in vivo zu untersuchen, wurde 3OH-GA 3H-markiert, in GCDH-defiziente und Wildtyp-Mäuse verschiedener Altersstufen intravenös injiziert und die Exkretionsrate und Organverteilung bestimmt. Mit Fluoreszenz-markierten Dextrane wurde die allgemeine Endothelintegrität untersucht. 6 Stunden nach Injektion war der überwiegende Anteil der Radioaktivität im Urin ausgeschieden, während im Hirngewebe nur Spuren nachweisbar waren. Allgemein war bei GCDH-/-Tieren die Aufnahme in verschiedene Gewebe geringer als bei Wildtyp-Tieren. Dagegen konnte bei GCDH-/-Mäuse im Alter von 42 d eine höhere Menge Radioaktivität in Darm und Faeces nachgewiesen werden. Die Darstellung Fluoreszenz-markierter Dextrane weist auf Veränderungen in der intracerebralen Endothelstruktur GCDH-defizienter Tiere hin. Die Untersuchungen zeigen, dass 3OHGA a) unter basalen Bedingungen vorwiegend endogen von neuronalen Zellen produziert wird und aus der Zirkulation die Blut-Hirn-Schranke nicht signifikant überwinden kann, b) die intracerebrale Endothelstruktur bei GCDH-/-Mäusen verändert, und c) altersabhängig nicht nur über den Urin, sondern auch intestinal ausgeschieden werden kann.

H9 Aktuelle Ansätze in der Diagnostik der Hypercholesterinämie C Luley Institut für Klinische Chemie und Pathobiochemie Klinikum der Otto-vonGuericke-Universität Magdeburg Leipziger Str. 44 39120 Magdeburg Genetische Formen der Hypercholesterinämie gehören zu den häufigsten angeborenen Stoffwechselstörungen. Die familiäre Hypercholesterinämie liegt heterozygot bei etwa 1 von 500 Neugeborenen vor, die homozygote Form bei 1 von 2 Millionen. Da es bei der unbehandelten familiären Hypercholesterinämie bereits in der Kindheit zu rasch fortschreitenden atherosklerotischen Gefäßveränderungen kommt, ist eine frühzeitige Diagnose anzustreben. Ein bevölkerungsweites Cholesterin-Screening bei Neugeborenen ist nicht vertretbar. Der prädiktive Wert und damit die Kosten-NutzenRelation werden erst günstig bei einer Erhöhung der Prävalenz in ausgesuchten Kollektiven, z.B. bei bekannter Hypercholesterinämie beider Monatsschrift Kinderheilkunde 6 · 2006

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Abstracts Elternteile. Diese Einschränkung gilt erst recht für molekular-biologische Verfahren. Von Bedeutung sind diagnostische Grenzwerte, deren Datenbasis gegenwärtig dünn ist und die durch die Alterabhängigkeit kompliziert werden. Methodisch sind die Bestimmung des Gesamtcholesterins oder des teureren Apolipoprotein B zu erwägen.

H10 Hypercholesterinämie bei Kindern und Jugendlichen B Koletzko Dr. von Haunersches Kinderspital, Klinikum d. Univ. München Primär genetische Hypercholesterinämien gehören zu den häufigsten angeborenen Stoffwechselstörungen. Schwere Formen von Hyperlipidämien sollten vom Kindes- und Jugendalter an evaluiert und behandelt werden, da schon im Kindesalter Gefäßläsionen entstehen, deren Ausmaß mit der Höhe des LDL-Cholesterins bzw. des LDL/HDL-Cholesterin Quotienten assoziiert sind. Grundlage der Therapie ist eine Ernährungsmodifikation mit Begrenzung der Zufuhr gesättigter und trans-ungesättigter Fettsäuren, bei reichlicher Zufuhr von einfach ungesättigten Fetten. Wenn unter Diät Plasmalipide und weitere Befunde für eine hohes Artheroskleroserisiko sprechen, sollte in Absprache mit einem pädiatrischen Stoffwechselzentrum ab etwa 7-8 Jahren zusätzlich zur Diätbehandlung eine medikamentöse Therapie erwogen werden. Neue pathophysiologische Erkenntnisse haben die Therapiemöglichkeiten erweitert. Cholesterinsynthesehemmer hemmen effektiv die HMG-CoA-Reduktase, das Schlüsselenzym der Cholesterinbiosynthese, und werden bei Erwachsenen seit Jahren als Standardtherapie eingesetzt. Die verminderte intrazelluläre Cholesterinsynthese vor allem in Leberzellen führt zu einer Hochregulation der LDL-Rezeptoren und damit zu einer vermehrten LDL-Aufnahme aus dem Plasma. Dadurch können Cholesterinsynthesehemmer je nach Substanz und Dosis das Plasmacholesterin um bis zu 40  und das LDL-Cholesterin um bis zu 45  senken. Triglyzeride werden leicht erniedrigt, HDL-Cholesterine leicht erhöht. Bei Schulkindern und Jugendlichen mit primär genetischer und sekundärer Hypercholesterinämie senkt eine medikamentöse Therapie mit Statinen (Atorvastatin, Lovastatin, Simvastatin, Pravastatin) die mittlere LDL-Cholesterinkonzentration um 20-60 , bei insgesamt sehr geringer Rate an beobachteten Nebenwirkungen. Zu den Nebenwirkungen der Statine zählen Erhöhungen der Transaminasen und Myopathien mit Muskelschmerzen und –schwäche, Erhöhung der CK bis zum Zehnfachen der oberen Referenzwerte und in sehr seltenen Fällen schwere Rhabdomyolysen. Deshalb sollen die Transaminasen (GOT, GPT) und die Creatin-Kinase (CPK) sechs Wochen nach Beginn einer Statinbehandlung und danach erneut nach drei und je sechs weiteren Monaten bestimmt werden, bei Anstieg auf das Dreifache der oberen Norm sollte die Behandlung abgebrochen werden. Die klassischen Statine werden über Cytochrom P450A metabolisiert und stehen damit in Interaktion mit anderen über diesen Stoffwechselweg katabolisierten Medikamenten (z. B. Makrolidantibiotika, Antimykotika), so dass die gleichzeitige Therapie das Nebenwirkungsrisiko erhöhen kann. Nicht über Cytochrom P450A metabolisiert wird Pravastatin, das in Deutschland derzeit als einziges Statin für die Therapie im Kindesalter ab dem Alter von 8 Jahren zugelassen ist. Ezetimib hemmt die intestinale Cholesterinresorption durch spezifische Inhibierung des Sterintransporters an der Bürstensaummembran. Im Gegensatz zu Anionenaustauscherharzen resultiert keine Resorptionsminderung fettlöslicher Vitamine. Das LDL-Cholesterin kann im Serum um 15-20  gesenkt werden. Ezetimib kann ab dem 10. Lebensjahr in einer Dosis von 1x10 mg/d verabreicht werden, Nebenwirkungen sind sehr selten. Eine Kombinationstherapie von Ezetimib mit HMG-CoA-ReduktaseInhibitoren (Statinen) ist aufgrund des unterschiedlichen und komplementären Wirkungsmechanismus bei gegebener Indikation sinnvoll und hat eine deutlich stärkere cholesterinsenkende Wirkung als eine Statin-Monotherapie.

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H11 IMAGING CAROTID ARTERIAL WALLS OF FH CHILDREN AND THE PREVENTION OF ATHEROSCLEROSIS E de Groot, JJP Kastelein Department of Vascular Medicine,Academic Medical Centre, F4-159.2,Meibergdreef 9, 1105 AZ Amsterdam,The Netherlands Carotid intima-media thickness (IMT) acquired by means of B-mode ultrasound imaging of carotid arterial walls has increasingly proven its value as an in-vivo, non-invasive vascular research tool. Ultrasound IMT measurements can document arterial wall changes as a continuous variable throughout life in groups at cardiovascular disease risk and in unaffected controls. As supported by the results of epidemiological studies and drug trials, the method can investigate the need for vascular disease prevention and evaluate cardiovascular disease risk reduction by therapeutic regimens in populations at risk. Interestingly, already at very young age statin effects in FH children can be observed. IMT data comply with the statistical definition of a surrogate biomarker. Consequently, carotid IMT is considered a truly validated surrogate endpoint for atherosclerosis progression and future and present atherosclerotic disease risk. Presently, ultrasound arterial wall imaging studies go through a series of rapid methodological, technical and procedural developments. The approach to imaging studies is therefore standardization that allows for complementary observational and trial data that can be quality assessed and controlled. For that purpose, integration of fully digitized state-of-the-art technology of imaging and image analysis protocols, and datamanagement and statistical analyses procedures is crucial. We present carotid ultrasound imaging as an elegant tool with widespread scientific and clinical applications in atherosclerosis research and cardiovascular disease prevention.

F8 Hereditärer NPP1-Mangel: Ein neues Modell der Arterienkalziﬁkation F Rutsch1, Y Nitschke1, U Hansen2, W Völker3, N Ruf4, P. Nürnberg5, G Weißen-Plenz3 1Kinderklinik, 2Institut für Physiologische Chemie u. Pathobiochemie, 3Institut für Arterio-skleroseforschung, Universitätsklinikum Münster, 4MDC Berlin, 5Cologne Center for Genomics, Köln Wir konnten bei Patienten mit generalisierter infantiler Arterienkalzifikation (GACI) eine hereditäre Defizienz der Nukleotidpyrophosphatase/ Phosphodiesterase 1 (NPP1) nachweisen. Ein ähnlicher Phänotyp besteht bei der ttw/ttw Maus, einer natürlichen enpp1-Mutante. Wir sequenzierten das ENPP1-Gen in 23 Familien mit GACI. Zur Charakterisierung des NPP1-defizienten Phänotyps untersuchten wir die Aorten von ttw/ttw Mäusen mit histologischen, ultrastrukturellen und immunbiochemischen Methoden (von Kossa und Alzianblau Färbung, Elektronenmikroskopie, Immunogoldmarkierung). Bei 18 von 23 GACI Patienten identifizierten wir 24 verschiedene homozygote oder compound heterozygote ENPP1 Mutationen. Die Mutationen waren über die gesamte kodierende Region verteilt. Die Aorten zeigten chondrogene Zentren. Die kalzifizierte Gefäßmatrix war fragmentiert. Immunogoldmarkierungen isolierter Kollagenfibrillen zeigten neben Typ I auch Typ II Kollagen, einen typischen Marker chondrogener Differenzierung. Ein breites Spektrum von ENPP1 Mutationen ist ursächlich für die GACI. Die strukturellen Veränderungen der arteriellen Gefäßwand bei NPP1-Mangel gehen mit einer chondrogenen Differenzierung einher. Der hereditäre NPP1-Mangel ist ein neues Modell zur Aufklärung der Mechanismen der Arterienkalzifikation.

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Aminoazylase 1-Mangel, ein „neuer“ angeborener Stoﬀwechseldefekt JO Sass* , V Mohr, H Olbrich, U Engelke, J Horvath, M Fliegauf, NT Loges, S Schweitzer-Krantz, R Moebus, P Weiler, A Kispert, A Superti-Furga, RA Wevers, H Omran Freiburg, Nijmegen, Düsseldorf, Bad Homburg, Dortmund, Hannover *Stoﬀwechsellabor, Zentrum für Kinderheilkunde und Jugendmedizin, Universitätsklinikum Freiburg, Mathildenstr. 1, 79106 Freiburg

Reduzierte DOPA-Aufnahme bei erwachsenen Patienten mit Phenylketonurie: erste Ergebnisse E Mengel1, HG Buchholz2, C Landvogt2, F Zepp1, K Ullrich3, P Bartenstein2 1Universitätskinderklinik Mainz, Langenbeckstr. 1, 55131 Mainz 2 Nuklearmedizin der Universitätsklinik Mainz, Langenbeckstr. 1, 55131 Mainz 3 Universitätskinder-klinik Hamburg Eppendorf, Martinistr. 52, 20246 Hamburg

Beim Morbus Canavan handelt es sich um eine seltene neurodegenerative Krankheit, die meist in früher Kindheit zum Tode führt, wenngleich auch vergleichsweise milde Verläufe beschrieben worden sind [1]. In der Labordiagnostik des Morbus Canavan sind die erhöhte Konzentration des N-Azetylaspartats im Urin und verminderte Aktivität der Aminoazylase 2 (Aspartoazylase; EC 3.5.1.15) wegweisend. Wir berichten nun von vier pädiatrischen Patienten, die im Urin erhöhte Konzentrationen mehrerer N-azetylierter Aminosäuren aufwiesen, aber kein vermehrtes N-Azetylaspartat [2]. Dieses MetabolitenMuster wurde als Hinweis auf einen Aminoazylase1-Mangel interpretiert. Aminoazylase 1 (ACY1; EC 3.5.1.14) trägt unter anderem dazu bei, Aminosäuren aus abgebauten N-terminal azetylierten Proteinen (z.T. mehr als 50 der zytosolischen Proteine) wieder für die Proteinsynthese nutzen zu können. Enzymaktivitätstests in Lymphoblasten bestätigten bei den drei dafür zur Verfügung stehenden Patienten einen Aminoazylase-1-Mangel. Mutationsanalysen ergaben bei allen vier Kindern Homozygotie oder Compound-Heterozygotie für loss-of-function- oder missense-Mutationen in ACY1. Wir schließen daraus, dass ACY1-Mutationen bei den Patienten zu funktionellem ACY1-Mangel und zu vermehrter Ausscheidung von N-azetylierten Aminosäuren geführt haben. Die klinische Relevanz des ACY1-Mangels ist noch unklar. Die vier Patienten wurden im selektiven Screening nach angeborenen Stoffwechselstörungen detektiert (veranlaßt wegen a) unspezifischer psychomotorischer Retardierung, b) psychomotorischer Entwicklungsstörung bei Vermis-Atrophie und Syringomyelie, c) muskulärer Hypotonie) bzw. bei der Bestimmung der organischen Säuren im Rahmen der Verlaufskontrolle bei frühdiagnostiziertem Biotinidase-Mangel (klinisch unauffällig). Weil ACY1 evolutionär konserviert und im Zentralen Nervensystem (ZNS) exprimiert wird, ist eine Rolle des Enzyms in der Entwicklung oder Funktion des ZNS denkbar, sie wurde bislang aber nicht bewiesen. Gegenwärtig ist unklar, ob der ACY1-Mangel pathologische Bedeutung hat oder nur eine biochemische Variante darstellt. Diagnostische Abklärung und Verlaufskontrollen bei weiteren Individuen mit vermehrten N-azetylierten Aminosäuren im Urin können helfen, die klinische Bedeutung dieses Stoffwechseldefektes richtig einzuschätzen. Literatur: [1] Tacke U, Olbrich H, Sass JO, Fekete A, Horvath J, Ziyeh S, Kleijer WJ, Rolland MO, Fisher S, Payne S, Vargiami E, Zafeiriou DI, Omran H. Possible genotype-phenotype correlations in children with mild clinical course of Canavan disease. Neuropediatrics 2005;36:252-5 [2] Sass JO, Mohr V, Olbrich H, Engelke U, Horvath J, Fliegauf M, Loges NT, Schweitzer-Krantz S, Moebus R, Weiler P, Kispert A, Superti-Furga A, Wevers RA, Omran H. Mutations in ACY1, the gene encoding aminoacylase 1, cause a covel inborn error of metabolism. Am J Hum Genet 2006;78(3):401-9

Bei Patienten mit PKU und dauerhaft erhöhten Phenylalanin ist mit einer Verarmung an Dopamin in den dopaminergen Neuronen des Striatums aber auch extrastriatal zu rechnen. Ziel der Studie ist die nicht invasive Quantifizierung der F-18 Dopa Aufnahme im präsynaptischen Neuron. Die Anreicherung wird beim Gesunden determiniert von der Aktivität der Dopa-Decarboxylase, hängt jedoch auch vom Dopa –Transport in das Neuron ab. Bisher wurden n=5 Patienten (4w, 1m) im Alter von 21-27 Jahren untersucht. Durchgeführt wurde eine dynamische PET-Messung mit 18FFluoro-Dopa. Aus den Zeitaktivititätskurven wurde der DOPA-Influx (Ki) für die Dopa-Decarboxylase-Aktivtität berechnet. Zum Vergleich dient ein Kontrollkollektiv von n=12 alters- und geschlechtsangepassten Kontrollen. Alle PKU-Patienten zeigten in der neurologischer Untersuchung keine extrapyramidalen Bewegungsstörungen. Die Phe-Serumkonzentrationen wurde bei den 5 Patienten mit 18,5 bis 27,0 mg/dl deutlich erhöht gemessen. Die Ki-Werte waren bei allen PKU-Patienten deutlich reduziert (im Mittel um 38) entsprechend einem Ki von 0.0051 +/- 0.0009 bei PKU im Vergleich zu 0.0088 +/- 0.0010 bei gesunden Kontrollen (p<0,001). Die Ergebnisse deuten auf eine ausgeprägte Verminderung der striatalen Dopa-Aufnahme bei Erwachsenen PKU-Patienten hin, die wahrscheinlich durch eine kompetitive Hemmung des Dopa/Tyrosin Transports durch Phenylalanin in die Zelle bedingt ist. Inwieweit die Decarboxylaseaktivität zusätzlich reduziert ist, kann nicht differenziert werden. Der wahrscheinlich resultierende striatale Dopamin Mangel führt nicht zu einem Parkinson-Syndrom, aber erklärt möglicherweise über eine Affektion der limbischen Schleifen die psychischen Auffälligkeiten, die bei Erwachsenen PKU-Patienten beschrieben sind.

F11 Ahornsirupkrankheit (MSUD): Vorteilhafter Eﬀekt einer frühen Diagnose-stellung im Neugeborenenscreening auf den neonatalen Verlauf E Simon1, R Fingerhut 2, J Baumkötter 3,V Konstanopoulou 4, R Ratschmann 5,U. Wendel 1 Universitätskinderkliniken Düsseldorf1, TU München3,Heidelberg4 und Wien5; Labor Becker, Olgemöller und Kollegen, München2 Im Rahmen des erweiterten Neugeborenenscreenings mittels Tandem-MS werden seit 2001 alle Neugeborenen in Deutschland und Österreich auch auf Ahornsirupkrankheit (MSUD) gescreent. Dies ermöglicht eine prä- oder frühsymptomatische Diagnosestellung und Behandlung. Der klinische und laborchemische Verlauf während der ersten Lebenswochen von den 10 bisher im Screening detektierten Patienten mit klassischer MSUD wurde dem Verlauf bei den 10 jüngsten deutschen klinisch diagnostizierten Patienten gegenübergestellt. Die gescreenten Patienten wurden zu einem früheren Zeitpunkt diagnostiziert und zeigten eine mildere klinische Symptomatik sowie einen geringeren Anstieg des Plasmaleucins. Bei diesen Patienten scheint eine neonatale Detoxifizierung ohne den Einsatz invasiver extracorporaler Methoden möglich. Die Diagnosestellung im Screening in Kombination mit dem frühzeitigen Beginn einer adäquaten Therapie hat einen vorteilhaften Effekt auf den Verlauf der neontalen Entgleisung. Monatsschrift Kinderheilkunde 6 · 2006

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Abstracts Als METABNET-Projekt gefördert vom Bundesministerium für Bildung und Forschung (Förderkennzeichen 01GM0305).

F12 Neugeborenen-Screening auf hepatorenale Tyrosinämie (HT) durch MS/MS Quantiﬁzierung von Succinylaceton J Sander1, N Janzen1, M Peter1, B Schwahn2, FK Trefz3, AM Das4 1Screening-Labor Hannover, 2Kinderklinik, Universität Düsseldorf, 3Kinderklinik, Kreiskrankenhaus Reutlingen,4Kinderklinik, Med. Hochschule Hannover HT ist behandelbar, ist aber mangels Sensitivität/Spezifität noch nicht Teil des NG-Screenings. An 60.000 anonymisierten Proben des NG-Screenings wurde eine MS/ MS Methode (Allard et al., Clin Biochem 37;2004, 1010) zur Bestimmung von SA an bereits mit Methanol extrahierten Proben getestet. 99,6 enthielten < 5μM SA. Mit dem Cut off von 10μM ergab sich kein falsch positiver Wert. Zwei positive Proben (152 und 271 μM SA, Tyrosin 54 und 129 μM) wurden unter Aufdeckung der Namen Neugeborenen der 36. bzw. 56. Lebensstunde zugeordnet. Die Therapie begann präsymptomatisch. Retrospektiv ergab sich in den Screeningproben zweier bekannter Fälle für SA 46 und 169 μM. Die MS/MS Analyse von SA erlaubt die Diagnose der HT ohne die bei Bestimmung von Tyrosin hohe Zahl falsch Positiver und falsch Negativer. Sie kommt ohne zusätzliches Probenmaterial und mit preisgünstigen Reagenzien aus, ist sensitiv und spezifisch, erfordert jedoch einen separaten MS/MS-Lauf. Sie kann für Verlaufskontrollen bei HT eingesetzt werden.

F13 Kriterien zur Beurteilung der mitochondrialer Pathologie: Die Bedeutung eines Punktesystems für die Diagnostik von Störungen in der oxidativen Phosphorylierung E Morava, B van den Heuvel, F Hol, M de Vries, M Hogeveen, R Rodenburg, J Smeitink Nijmegen Aufgrund einer vorliegenden prospektiven, klinischen und biochemischen Studie wurde ein Punktesystem zur Beurteilung von Patienten mit dem Verdacht auf eine Störung der Atmungskette entwickelt. Dieses Punktesystem besteht aus einer Reihe von klinischen, biochemischen, radiologischen und histologischen Kriterien. Um das spezifische diagnostische System zu evaluieren, wurde das Punktesystem bei 61 Kindern mit dem Verdacht auf eine Störung in der oxidativen Phosphorylierung und einer Multi-System Krankheit evaluiert. Die Daten von 44 Kindern mit einer bewiesenen Störung in der oxidativen Phosphorylierung mit Mutationen in der mitochondrialen oder Zellkern DNS wurden verglichen mit den Daten von 17 Kindern, bei denen ebenfalls eine Muskelbiopsie entnommen wurde, jedoch mit Hilfe von molekular-genetischen Analysen eine non-mitochondriale Multi System Krankheit diagnostiziert wurde. Alle Kinder mit einer bewiesenen Störung in der primären Atmungskette erzielten zum Zeitpunkt der Muskelbiopsie mehr als 6 Punkte (wahrscheinliche Störung in der Atmungskette), 73 der Kinder erzielten mehr als 8 Punkte (definitive Störung in der Atmungskette). In der Gruppe der nicht mitochondrialen Erkrankungen wurden signifikant niedrigere Punkte erzielt. Keiner dieser Patienten erreichte eine Punktzahl von mehr als 8. Das Punktesystem zur Beurteilung von mitochondrialen Erkrankungen ist geeignet zur Diagnostik von Störungen in der oxidativen Phosphorylierung und kann bei dem klinischen Verdacht auf eine Störung in der Atmungskette bereits vor der Entnahme der Muskelbiopsie angewendet werden

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F14 Energiestoﬀwechsel bei M. Fabry: Einﬂuss der ERT mit Agalsidase alpha AM Das, S Müthing, A Meinel, S Illsinger, T Lücke Kinderklinik der MHH, 30625 Hannover M. Fabry (MF) ist eine Speichererkrankung mit Multiorganbeteiligung. Kürzlich haben wir an Hautfibroblasten (HF) gezeigt, dass es bei MF zu Abnormalitäten der Atmungskettenenzyme (AK) mit verminderter Energiebereitstellung kommt. Wir untersuchen nun, ob diese Veränderungen durch Enzymersatztherapie (ERT) reversibel sind. HF von Pat. mit MF wurden in vitro mit Agalsidase alpha in einer Konzentration von bis zu 20 μg/ml über max. 10 d inkubiert. Die Aktivitäten der AK I-V wurden spektrophotometrisch bestimmt. Die Aktivität von AK I+III stieg unter ERT zeit- und dosisabhängig an, hingegen fiel die Aktivität von AK V (ATPsynthase) ab. Die Beeinträchtigung der Energiebereitstellung in HF von MF-Patienten kann auf einer abnormalen Zusammensetzung der Mitochondrienmembran beruhen. Dies ist Folge eines gestörten Lipid-Transports zwischen Lysosom und Mitochondrium aufgrund des Enzymdefekts mit intralysosomaler Lipidspeicherung. Diese Veränderungen sind unter ERT nur langsam reversibel, eine vorübergehende Verschlechterung des Energiestoffwechsels ist möglich. HF von Pat. mit MF, die über mehrere Monate Infusionen zur ERT erhielten, zeigten normalisierte AK-Aktivitäten

F15 Mutationen im Deoxyguanosine-Kinase-Gen (DGOUK): Ursache des hepato-zerebralen mitochondrialen DNA Depletion-Syndroms (MDS) P Freisinger, N Fütterer, E Lankes, R Santer, R Horváth Stoﬀwechselzentrum, Kinderklinik TU München und Inst. für Klin. Chemie, Städt. Klinikum GmbH, München Bei MDS führen Anomalien der Synthese der mitochondrialen DNA zu Störungen der oxidativen Phosphorylierung. Bei der hepatozerebralen Form sind Mutationen im DGOUK-Gen beschrieben. Wir beschreiben das Spektrum des hepatozerebralen MDS bei 6 Patienten. Von 12 Patienten mit infantiler Hepatoenzephalopathien und MDS konnten wir bei 6 Patienten pathogene Mutationen im DGUOK-Gen finden. Alle zeigten eine schwere Hepatopathie in den ersten 6 Lebensmonaten. Die Beteiligung weiterer Organssysteme (ZNS, Muskel) war variabel. Bei einer Patientin war die ZNS-Beteiligung nur gering. 5 neue und 2 beschriebene Mutationen wurden identifiziert. 3 unterschiedliche Mutationen an Position 1 führen zu einem Austausch von Methionin, was ein Hinweis auf einen „hot spot“ sein kann. Bei der Transplantation wurde in der Leber eines Patienten ein hepatozelluläres Karzinom gefunden. Hohe alpha-Fetoprotein-Werte und typische sonographische Veränderungen der Leber bei einem zweiten Patient weisen auf eine vergleichbare Problematik hin. Dies könnten Hinweise für einen Zusammenhang zwischen mtDNA – Depletion und Tumorgenese sein.

F16 Mutationen der Polymerase Gamma (POLG1) als Ursache des Alpers-Syndroms und juveniler Epilepsien ohne Leberversagen R Horvath, N Fütterer, J Mayr, W Sperl, J Koch, Waltz, P Freisinger Stoﬀwechselzentrum, Inst. für Klinische Chemie und mitochondriale Diagnostik, Städt. Klinikum GmbH und Kinderklinik TU München Beim Alpers-Syndrom (hepatozerebrales Syndrom, HCS) sind seit kurzem Mutationen in POLG1 bekannt. In unserem Kollektiv mit HCS

konnten wir bei 7 Kindern pathogene Mutationen in POLG1 nachweisen. Zwei Patienten mit POLG1- Mutationen zeigten eine Epilepsie ohne Leberbeteiligung. Kardinalsymptom aller 9 Patienten war eine therapieresistente, progressive Epilepsie. 7 Patienten entwickelten ein Leberversagen. Alle 7 waren männlich mit unauffälliger Familienanamnese. Die Enzephalopathie begann im ersten Lebensjahr mit Stroke-like-Episoden und Myoklonien. 4 entwickelten eine Hepatopathie nach Valproatgabe. Zwei Patienten präsentierten eine fluktuierende Enzephalopathie ohne Leberversagen im Alter von 8 bzw. 10 Jahren. 5 von 7 Patienten mit HCS waren compound heterozygot für die häufige A467T Mutation in der „linker“-Region und unterschiedliche Mutationen in der Polymerase-Domäne. Die juvenilen Patienten waren homozygot für die häufige A467T-Mutation. Aufgrund der Häufigkeit ist bei allen Patienten mit HCS und bei unklaren juvenilen Myoklonus-Epilepsie ein Ausschluss der häufigen A467T Mutation in POLG1 zu erwägen.

F17 Enzymersatztherapie (EET) bei einem Kind mit infantilem M. Pompe E Mengel, C Kampmann, R Hartung, L Arash, J Bohl und M Beck Villa Metabolica, Universitätskinderklinik Mainz, Langenbeckst. 2, 55131 Mainz Unbehandelt versterben Kinder mit infantilem M. Pompe im ersten Lebensjahr. Leitbefunde sind schwere muskuläre Hypotonie sowie Kardiomyopathie mit schnell progredienter Hersinsuffizienz. Wir berichten über eine Patientin, die im Rahmen der Phase III Studien inzwischen 24 Monate mit EET ( Myozyme® ) behandelt wird. Bei unserer Patientin wurde die Diagnose im Alter von 4 Monaten durch Bestimmung der sauren α-Glukosidase im Muskelgewebe gestellt. Erste Symptome wie Trinkschwäche und muskuläre Hypotonie waren bereits im Alter von 3 Wochen feststellbar. Die Herzmasse war zum Therapiebeginn mit 236 g/m2 extrem erhöht, EF 51 . Nach nunmehr 24 Monaten ERT erfreut sich das Mädchen eines guten Ernährungs- und Allgemeinzustandes. Die Herzmasse und die Herzfunktion haben sich nach 12 Monaten Therapie normalsiert. Die kongestive Medikation konnte abgesetzt werden. Fortbestehende Problematik ist eine moderate Muskelschwäche. Freies Laufen ist noch nicht möglich. In der Muskelbiopsie vor Therapiebeginn zeigte sich eine ausgeprägte Speicherung mit Desorganisation der Muskelzellen. Nach 12 Monaten ERT ist eine partielle Reorganisation der Muskelzellen sowie deutlich weniger Speicherung zu erkennen. In der EM wird eine überwiegend extralysosomale Speicherung gesehen. Unter der EET mit Myozyme® ist unsere Patientin inzwischen mit einer guten Lebensqualität 2 Jahre alt geworden. Entscheidend für den optimalen Therapieerfolg erweist sich, dass die Diagnose möglichst frühzeitig gestellt wird, bevor irreversible, extralysosomale Glykogenspeicherung nachweisbar ist.

F18 Identiﬁzierung und molekulare Charakterisierung der GNPTA-Untereinheit der GlcNAc-1-Phosphotransferase bei Mukolipidose II und III S Tiede, K Ullrich, T Braulke Universitätsklinik Hamburg-Eppendorf, Klinik und Poliklinik für Kinderund Jugendmedizin, Martinistrasse 52, 20246 Hamburg Der Transport neusynthetisierter lysosomaler Enzyme zum Lysosom ist von der Ausbildung von M6P-Erkennungssignalen abhängig. Der initiale Schritt der Generierung des Erkennungssignals wird durch die GlcNac-1-Phosphotransferase katalysiert. Defekte in der GlcNAc1-Phosphotransferase führen zu den lysosomalen Speichererkrankun-

gen Mukolipidose Typ II und III. Die GlcNAc-1-Phosphotransferase wird von zwei separaten Genen kodiert (GNPTA und GNPTG, wobei GNPTA bisher unbekannt war. Durch GNPTG-Affinitätschromatographie von Golgi-Extrakten aus humaner Plazenta mit anschließender MALDI-TOF-Analyse wurde ein unbekanntes Protein identifiziert, das durch das GNPTA-Gen kodiert wurde. GNPTA enthält 21 Exons, die sich auf ca. 85 kb auf Chromosom 12q23.3 erstrecken. GNPTA kodiert für ein 1256 Aminosäuren großes Protein mit zwei Transmembrandomänen. Die Relevanz des gefundenen GNPTA-Gens, zeigte sich durch identifizierte Mutationen bei allen bisher untersuchten ML II-Patienten und bei einigen ML III-Patienten. Nach retroviraler Transduktion der humanen GNPTA-cDNA in MLIIPatientenfibroblasten und stabiler Selektion ist die GNPTA nachweisbar, und die Fehlsortierung lysosomaler Enzyme als auch die fehlende Phosphotransferase-Aktivität korrigiert. Die Daten belegen, daß es sich bei GNPTA um das kodierende Gen einer funktionellen Untereinheit der Phosphotransferase handelt. Dadurch ermöglicht sich die molekulare Diagnostik der Mukolipidose Typ II und III.

F19 Gesundheitsstatus und Lebensqualität erwachsener Patienten mit Glykogenose Typ I (GSD I) – Erste Ergebnisse eines Surveys für Deutschland. M Schwarz 1; D Häussinger 1;S Herpens1; B Hoﬀmann2; U Wendel2 1 Klinik für Gastroenterologie, Hepatologie und Infektiologie 2 Klinik für Allgemeine Pädiatrie Universitätsklinikum der Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf Patienten mit einer GSD I erreichen zunehmend das Erwachsenalter. Weder über Anzahl, Gesundheits- bzw. Sozialstatus oder die Lebensqualität gibt es bisher Daten. 28 Stoffwechselzentren und die Selbsthilfegruppe SHG wurden um Weiterleitung eines Fragebogens an die ihnen bekannten Pat. gebeten. Zur Messung der Lebensqualität wurde das EuroQol-Instrument (1) eingesetzt. 21/28 Zentren und die SHG meldeten insgesamt 65 erwachsene Pat. Erste Ergebnisse liegen von 40 Pat. (21 W, 19 M, 75 GSD Ia, 25 GSD Inon-a, mittleres Alter 27 (18-46) Jahre) vor. Der BMI liegt bei Männern und Frauen im Normbereich (23,1 bzw. 24,0 kg/m2), die Körpergröße unterhalb altersentsprechender Normwerte (173 bzw. 159 cm). 8/21 Frauen haben insgesamt 11 Kinder. 21 der Pat. berichten Leberadenome, 22 eine Proteinurie, 3 eine Niereninsuffizienz. Eine Einschränkung der Lebensqualität im Vergleich zur Normalbevölkerung findet sich für die Dimensionen Mobilität (12 vs 4,4), allg. Tätigkeiten (20 vs. 3,6), Schmerzen/Beschwerden (25 vs. 17,5) und ängstlich/deprimierte Stimmung (25 vs. 3,6). Die Daten beschreiben erstmals den Verlauf der GSD I bei Erwachsenen in verschiedenen gesundheitsbezogenen Dimensionen. Literatur: H. H. König, S. Bernert, M. C. Angermeyer: Gesundheitszustand der deutschen Bevölkerung: Ergebnisse einer repräsentativen Befragung mit dem EuroQol-Instrument. Gesundheitswesen 2005; 67:173 – 182

F20 Erhöhtes Risiko für Patienten mit nicht-neuropathische Verlaufsform des Morbus Gaucher im jungen Erwachsenalter an Malignomen zu erkranken G Schulze Frenking, M Beck und E Mengel Villa Metabolica, Universitätskinderklinik Mainz, Langenbeckst. 2, 55131 Mainz Bereits 4 Publikationen weisen ein erhöhtes Risiko für ein Plasmazytom bei Patienten mit der nicht-neuropathischen Verlaufsform des Monatsschrift Kinderheilkunde 6 · 2006

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Abstracts M. Gaucher nach. 2 der Arbeiten belegen zudem ein vermehrtes Auftreten von anderen Lymphomen in diesem Patientenkollektiv. Wir untersuchten die Inzidienz von Malignomen in der Mainzer PatientenKohorte. In unsere Patientengruppe, 89 Patienten (51 Frauen, 38 Männer) mit der nicht-neuropathischen Form des M.Gaucher, welche sich in dem Zeitraum von 1995-2005 mehr als einmal in unserer Gauchersprechstunde vorstellten, sind 9 Patienten (8 Frauen, 1 Mann) an einem Malignomen erkrankt. Bei 3 Patienten wurde ein Mammakarzinom, bei 2 ein Lymphom und bei jeweils einem ein Willmstumor, ein Zervixkarzinom, ein Basaliom und ein Bronchialkarzinom diagnostiziert. Nach statistischer Berechnung wären ca. 2 Malignome in unsrer Patientenkohorte zu erwarten gewesen. Auffällig ist, dass die Erstdiagnose unserer Patienten in Vergleich zur Gesamtbevölkerung schon in der 3. bis 4. Lebensdekade gestellt wurde (Median 32,5 Jahre). In unserer Patientenkohorte ist im Vergleich zur Normalbevölkerung nicht nur die Inzidenz von Lymphomen oder Plasmazytomen erhöht, sondern auch die generelle Malignominzidenz. Gaucher-Patienten sollten über dieses erhöhte Risiko informiert werden und auch schon in jungem Alter regelmäßig die Krebsvorsorgeuntersuchungen erhalten, um durch eine rechtzeitige Diagnose die Mortalität zu reduzieren.

P1 Metaanalyse von Reaktionszeitstudien zur Phenylketonurie J Albrecht, S Garbade, P Burgard METABNET c/o Universitätsklinik für Kinder- und Jugendmedizin INF 150 69120 Heidelberg Reaktionszeitstudien stellen einen wichtigen Bereich zur Outcomeforschung und zur Formulierung von Behandlungsempfehlungen dar. Systematische Literaturrecherche identifizierte 53 publizierte Studien im Zeitraum 1983-2005. Berechnet wurde die Effektgröße als standardisierte Distanz zwischen PKU-Stichprobe und Kontrollgruppe. 29 Studien berichten ausreichende Daten zur Berechnung der Effektgröße. Im Zeitraum 1983-2005 findet ein Trend von der Untersuchung Erwachsener und Jugendlicher zur Untersuchung von Kindern statt, obwohl die Behandlung von Kindern kaum umstritten ist. Neuere Studien mit Erwachsenen fehlen weitgehend. Über die Studien hinweg sind Phenylalaninspiegel positiv mit dem Stichprobenalter korreliert, wobei Studien mit Erwachsenen unter tiefen und Studien mit Kindern unter hohen Spiegeln fehlen. Obwohl eine große Zahl von Studien mit insgesamt großen Stichprobenumfängen publiziert wurde, sind diese Studien nur sehr eingeschränkt tauglich, wichtige anstehende Fragen zu beantworten. Metaanalyse stellt auch in der pädiatrischen Stoffwechselmedizin ein Instrument zur Analyse und Bewertung von Forschungsergebnissen dar.

P2 Schnelle und simultane Bestimmung von Biomarkern des Cholesterin-stoﬀwechsels mit LC-MS/MS U Ceglarek, J Lembcke, S Baumann, A Leichtle, GM Fiedler, J Thiery Institut für Laboratoriumsmedizin, Klinische Chemie und Molekulare Diagnostik Universitätsklinikum Leipzig Die Bestimmung von Markern der Cholesterinsynthese und -resorption erfolgt derzeit mittels GC-MS. Diese erfordert eine aufwendige manuelle Probenvorbereitung und ist deshalb nur eingeschränkt für klinische Untersuchungen einsetzbar. Eine neue LC-MS/MS Methode wurde für die Bestimmung von Phytosterolen (Cholesterinresorption) und Lanosterol (Cholesterinsynthese) entwickelt. Die Probenvorbereitung wurde auf einen einfachen Verdünnungsschritt reduziert (10μl Serum und 490μl Methanol/Acetonitril). In einer Analysenzeit von 7min erfolgte die simultane Quantifizierung

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von ß-Sitosterol, Campesterol, Brassicasterol, Stigmasterol, Cholesterol sowie Lanosterol. Die Detektionslimits der verschiedenen Sterole lagen zwischen 0,24-0,68μg/l. Intra- und Interassay CV lagen zwischen 2,4 und 9,9. Referenzwerte für Sterole wurden ermittelt. Die entwickelte APPI-MS/MS Plattform ermöglicht eine schnelle und robuste Untersuchung von Markern des Cholesterinstoffwechsels. Die Probenvorbereitungs- und Analysenzeit wurde von 4h (GC-MS) auf 15min reduziert.

P3 Nährstoﬀzufuhr und Serumlipoproteine bei Kindern mit primär genetischer Hypercholesterinämie vor und nach Ernährungsberatung K Dokoupil, U von Schenck, B Koletzko Dr. von Haunersches Kinderspital, München Eine Diättherapie ist die Basis der Behandlung von Kindern mit primär genetischer Hypercholesterinämie. Bei 46 Kindern im Alter von 5 – 12 Jahren wurde in der Stoffwechselambulanz der Kinderpoliklinik München eine Ernährungsberatung durchgeführt. Vor und 11 Wochen nach der Beratung wurde die Energie- und Nährstoffzufuhr anhand von häuslichen Wiegeprotokollen über 7 Tage mit Diät 2000, Vers. 3 berechnet sowie die Konzentration der Serumlipoproteine bestimmt. Die mittlere Zufuhr der gesättigten Fettsäuren konnte von 15,9 auf 10,6  der Energie (E) gesenkt werden (p<0,001). Die Zufuhr der mehrfach ungesättigten Fettsäuren konnte signifikant (6,9 vs 7,8 E p<0,05), die Aufnahme der einfach ungesättigten Fettsäuren tendenziell (11,6 vs. 12,7 E, n.s.) gesteigert werden. Trotz abnehmender Zufuhr an Gesamtfett (34,0 vs. 31,4 E, p<0,01) blieb die Energiezufuhr gleich (1568 vs. 1560 kcal, n.s.) Ohne cholesterinsenkende Medikamenten konnte die LDL-Cholesterinkonzentration um 16,6  gesenkt werden. Durch Ernährungsberatung kann das Ernährungsverhalten und die Serumlipoproteinwerte von Kindern mit Hypercholesterinämie verbessert werden, was ein vermindertes Risiko für die Entwicklung einer Atherosklerose erwarten lässt.

P4 Ezetimib zur Behandlung der Hypercholesterinämie bei Kindern und Jugendlichen I Hannibal, I Brokaert, C Kröner, K Dokoupil, B Koletzko Dr. von Haunersches Kinderspital, Klinikum der Universität München Ezetimib blockiert den intestinalen Cholesterintransporter und wird zur Behandlung der Hypercholesterinämie eingesetzt. Zur Wirkung bei Kindern ist wenig bekannt. Wir behandelten 22 Pat. mit primär genetischer Hypercholesterinämie (Alter 13 ± 0,4 Jahre, LDL-Chol. 293,5 ± 9,2 mg/dL; M+SE) mit Ezetimib (10mg/d) über mind. 2 Monate, 6 Pat. in Kombination mit Pravastatin (10-30 mg/d) und Ezetimib. Vor Therapie und 142 ± 21 Tage nach Therapiebeginn bestimmten wir Lipidwerte, GOT, GPT und die Gesamt-CK. Ezetimib wurde mit guter Compliance eingenommen, gut vertragen und führte zur signifikanten Reduktion des Gesamt-Chol.(17,5, p<0,001) und des LDL-Chol. (21,6, p<0,001). Es zeigten sich nicht signifikante Trends zur Zunahme von HDL-Chol. (5,1, p=0,13) sowie zur Reduktion der Triglyceride (7,5, p=0,23). GOT, GPT und die Gesamt-CK blieben unverändert. Ezetimib erscheint für die Therapie der Hypercholesterinämie bei Kindern ab 10 Jahren gut wirksam und geeignet.

P5 Ineﬀektive Enzymersatztherapie mit α-L-Iduronidase bei einer 6 jährigen Patientin mit bestehender Mukopolysaccharidose Typ I (M. Hurler) I Hannibal, C Kröner, B Koletzko Dr. von Haunersches Kinderspital, Klinikum der Universität München Bei der lysosomalen Speichererkrankung Mukopolysaccharidose Typ I besteht die Option einer Enzymersatztherapie mit α-L-Iduronidase. Die 6 jähr. Hurler-Pat. mit Compound-Heterozygotie für L-Iduronidasedefkt (Q70X, W402X), erhielt über 14 Monate wöchentlich α-L-Iduronidase (100 IE/kg/KG) i.v. mit dem primären Ziel, Atemwegsbeschwerden zu bessern. Die Patientin tolerierte die Therapie ohne klinische Nebenwirkungen, zeigte aber keine erkennbare Besserung. Die Lebergröße nahm zu, die Patientin hatte zunehmenden Sauerstoffbedarf und radiologisch entwickelte sich eine Verdichtung im Thorax am ehesten im Sinne einer Zunahme von lysosomalen Speichermaterial. Als mögliche Ursache diskutieren wir ein hohe Antikörperentwicklung mit einem max. Titer von 51.200 nach 7 monatiger ERT.

P6 Stoﬀwechselwirkung und hormonelle Eﬀekte von AminosäurenDiätetika I Knerr1, C Weigel1, C Kiener2, R Jung1, W Rascher1, M Rauh1 1Kinder- und Jugendklinik der Universität Erlangen-Nürnberg, Erlangen, 2 SHS Int., Heilbronn Wir untersuchten metabolische und endokrine Effekte diätetischer Aminosäuren (AA)-Mischungen, z.B. anabole Signale wie Insulin und orexigene Stimuli wie Ghrelin in Abhängigkeit von der Verfügbarkeit weiterer Makronährstoffe. 20 gesunde Probanden und 3 erwachsene Patienten mit Phenylketonurie erhielten an verschiedenen Tagen orale Testdosen von Easiphen, P-AM Anamix und P-AM 3 (0,35 g AA/kg). Die Laborparameter wurden über 5h bestimmt und mit denen nach Fasten und Milchpulver (MP) verglichen. Die max. AA-Konzentrationen waren protrahierter bei den angereicherten AA-Mixen und vergleichbar mit den MP-Gruppen, die InsulinSpitzenspiegel höher als bei reinen AA-Mischungen, bei denen Ghrelin steiler anstieg. Anabole Signale wie die Insulinsekretion und ein verzögerter Ghrelinanstieg sind bei zeitgleicher Verabreichung weiterer Makronährstoffe zu AA-Diätetika ausgeprägter als bei reinen AA-Mischungen. Dadurch sind ein besseres Sättigungsgefühl und ein höherer anaboler Effekt möglich.

P7 Internationale Querschnittsstudie zur Glutarazidurie Typ I (GA-I) S Kölker1, S Garbade1, C Greenberg, J Leonard, J Saudubray, A Ribes, H Kalkanoglu, A Lund, B Merinero, M Wajner, M Troncoso, M Williams, J Walter, J CampistolJ, M Martí-Herrero, Caswill, A Burlina, F Lagler, E Maier, B Schwahn, A Tokatli, A Dursun, T Coskun, R Chalmers, D Koeller, J Zschocke, E Christensen, P Burgard 1, GF Hoﬀmann 1 1Universitäts-Kinderklinik Heidelberg (Studienzentrale) Wir untersuchten den natürlichen Verlauf der GA-I sowie deren Behandelbarkeit an 279 Patienten. 61 Patienten wurden präsymptomatisch diagnostiziert. Neurologisch symptomatische Patienten hatten zumeist eine enzephalopathische Krise (n=185), die sich in einem engen Zeitfenster (Median: 9 Monate) unabhängig vom biochemischen Phänotyp ereignete und Bewegunggstörungen, Sekundärkomplikationen und eine reduzierte Lebenserwartung (Überlebensrate: ca. 50 nach 25 Jahren) zur Folge hatte. Prädiktoren eines positiven Verlaufs waren

eine frühzeitige Diagnosestellung sowie Carnitinsupplementation und Lysinrestriktion. Die Studie zeigt, dass der Verlauf der GA-I bei frühzeitiger Diagnosestellung therapeutisch beeinflussbar ist. Literatur: Kölker et al (2006) Natural history, outcome, and treatment efficacy in children and adults with glutaryl-CoA dehydrogenase deficiency. Pediatr Res, in press.

P8 Hereditäre Orotacidurie bei einem 3-jährigen Knaben P Lauenstein 1), G Seidlitz 1) , C Schröder 1), D Haas 2), GF Hoﬀmann 2), U Kordaß3), L Fairbanks 4), H Lauﬀer1) 1) Kinderklinik, EMA-Universität, Greifswald, 2) Kinderklinik, Ruprecht-KarlsUniversität, Heidelberg, 3) Humangenetik, EMA-Universität, Greifswald, 4) Guy’s Hospital, King’s College, London Hereditäre Orotacidurie resultiert aus einem Defekt in der Pyrimidinbiosynthese. Ursache des Krankheitsbildes ist ein Mangel an UridinMono-Phosphat-Synthase (UMPS). Diese Erbkrankheit ist selten, es wurden bisher 14 Fälle publiziert. Sie ist durch Anämie und Verzögerung der geistigen und körperlichen Entwicklung charakterisiert. Wir berichten über einen 3-jährigen Knaben, der sich mit einem generalisierten Krampfanfall in unserer stationären Behandlung befand. Einzige reproduzierbare pathologische Befunde waren eine über 100-fach erhöhte Orotatausscheidung im Urin und ein Verlangsamungsherd im EEG. Die psychomotorische und somatische Entwicklung des Kindes ist normal. Die Diagnose wurde durch die Enzymaktivitätsbestimmung der UMPS in lysierten Erythrozyten gestellt. Die Behandlung des Kindes wird mit Uridin und antiepileptisch mit Oxcarbazepin durchgeführt; die Orotatausscheidung im Urin wurde stark gesenkt. Ein kausaler Zusammenhang zwischen dem Enzymdefekt und der Krampfanfälle ist zu diskutieren.

P9 NO-Stoﬀwechsel bei Kindern mit Hypercholesterinämie Typ II A T Lücke, *D Tsikas, AJ Fuchs, N Kanzelmeyer, #B Vaske, AM Das Kinderklinik, * Klin. Pharmakologie, #Biometrie, Medizinische Hochschule, 30625 Hannover Bei Erwachsenen mit Hypercholesterinämie Typ IIA (HCH) sind die Konzentrationen des Asymmetrischen-D-Methyl-Arginins (ADMA= endogener Antagonist der NO-Synthase) im Plasma erhöht. Bei 24 Kindern (mittleres Alter 10.3, Range 5-16 Jahre) mit HCH ohne medikamentöse Therapie wurde im Vergleich zu altersgematchten Kontrollen der NO-Stoffwechsel untersucht. GC-MS-MS: ADMA im Plasma und Urin. GC-MS: Nitrit und Nitrat in Serum, Plasma und Urin sowie Dimethylamin (DMA) im Urin. Bei signifikanten Unterschieden der Cholesterinkonzentrationen (259 mg/dl, HCH vs. 186 mg/dl, Kontrolle; p < 0.001) war ADMA im Plasma bei HCH zwar tendentiell, jedoch nicht signifikant, höher als bei Kontrollen (0.61μM, HCH vs. 0.58 μM, Kontrolle; p>0.05). Es fanden sich tendentiell erhöhte Werte für DMA bei HCH, was auf eine gesteigerte Hydrolyse des ADMA hindeutet. Die Befunde für Nitrat/Nitrit waren nicht richtungsweisend. Kinder mit HCH zeigen im Gegensatz zu Erwachsenen nicht-signifikant erhöhte ADMA-Werte. ADMA könnte bei Adoleszenten mit HCH als Verlaufsparameter zur Abschätzung der vaskulären Schädigung bedeutsam sein.

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Abstracts P10 METABNET c/o Universitätsklinik für Kinder- und Jugendmedizin, 69120 Heidelberg www.metabnet.de In einer dynamischen Posterpräsentation mit Beamer werden die Ziele des Forschungs- und Versorgungsnetzwerks METABNET – Netzwerk für im Neugeborenenscreening erfassbare genetische Stoffwechselstörungen - dargestellt. Es erfolgt ein Überblick über die Projekte und insbesondere über Datenbanken für ein Epidemiologisches Register für angeborene Stoffwechselkrankheiten sowie die Patientendokumentation in Behandlungszentren. Außerdem wird die Homepage des Netzwerks mit ihren verschiedenen Leistungsbereichen dargestellt. METABNET wird vom Bundesministerium für Bildung und Forschung unter dem Förderkennzeichen 01GM0305 gefördert.

P11 Defekte der Cholesterolbiosynthese und des intrazellulären Cholesteroltransports als Ursache der Holoprosenzephalie (HPE) J Morgenthaler, T Paulik-Rebe, F Lacbawan, B Long, JG Okun, GF Hoﬀmann, M Muenke, DHaas Universitätsklinikum für Kinder- und Jugendmedizin, Heidelberg Die HPE ist die häufigste strukturelle Fehlbildung des sich entwickelnden menschlichen Gehirns. Die Pathogenese ist komplex und bei der Mehrzahl der Patienten bleibt die Ursache der Fehlbildung unklar. In Tiermodellen spielen Störungen der Cholesterol-Homöostase eine wichtige Rolle. Deshalb wurde die Cholesterolbiosynthese in Lymphoblasten von 230 HPE-Patienten untersucht. Es wurde ein in-vitro Belastungstest entwickelt, der [2-14C]-Acetat als Substrat verwendet und auffällige Muster der C27-Sterole in Lymphoblasten sicher identifiziert. Bei 22 Patienten (9,6 ) wurde ein auffälliges Sterolmuster gefunden. Bei einem Patienten wurde die Diagnose eines SLOS gestellt, die Muster der anderen Patienten konnten keinem Einzelenzymdefekt zugeordnet werden. 6 dieser Patienten hatten zusätzlich Mutationen in mit HPE assoziierten Genen. Eine beeinträchtigte Cholesterolsynthese trägt zur Pathogenese der HPE bei und sollte in der Evaluation der Patienten auch dann berücksichtigt werden, wenn bereits Mutationen in HPE-Genen identifiziert wurden.

P12 Können angeborene Fehlbildungen auf eine Stoﬀwechselerkrankung hinweisen? S Pötzsch1, K Mohnike2, I Starke2 Fehlbildungsmonitoring Sachsen-Anhalt1, Zentrum für Kinderheilkunde2, Otto-von-Guericke-Universität Magdeburg, Mail: [email protected] Die Diagnose einer Stoffwechselerkrankung kann in jedem Lebensalter gestellt werden. Ggf. sind bereits bei der Geburt morphologische Stigmata hinweisend für einen spezifischen Defekt sind. Dies ist u.U. für die Therapie, die Prognose sowie die Patientenbetreuung bedeutsam. Kasuistik 1: Vorgestellt wird ein Frühgeborenes der 28. SSW. Es fällt ein hoher gotischer Gaumen und eine Spalte des weichen Gaumens auf, weiterhin eine muskuläre Hypotonie sowie Ernährungsstörungen. Durch die Sterolbestimmung kann ein Smith-Lemli-Opitz-Syndrom gesichert werden. Die Therapie erfolgt mit Simvastatin. Der Pat. entwickelt sich zwar verzögert, jedoch deutlich positiver als die im Alter von 4 J. diagnostizierte Schwester. Kasuistik 2: Es handelt sich um einen 6 Wochen alten Säugling mit Makrocephalus und Nystagmus. Durch die Untersuchung der organ. Säuren im Urin wird ein Mb. Canavan diag-

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nostiziert. Die sich später entwickelnde Epilepsie wird medikamentös nur unbefriedigend beeinflusst. Die Eltern lehnen eine experimentelle Gentherapie ab. Bei Vorliegen einer angeborenen Fehlbildung sollte insbesondere bei gleichsam nachweisbaren neurologischen Symptomen an eine Stoffwechselerkrankung gedacht werden.

P13 Knochenstatus bei Kindern und Jugendlichen mit Phenylketonurie S Pötzsch1, K Mohnike2, I Starke2 Fehlbildungsmonitoring Sachsen-Anhalt1, Zentrum für Kinderheilkunde2, Otto-von-Guericke-Universität Magdeburg Bei Pat. mit Stoffwechselerkrankungen, z.B. Phenylketonurie (PKU) liegt ein erhöhtes Risiko vor, eine Osteoporose zu entwickeln. In der Literatur wird über eine Verminderung insbesondere der spongiösen Knochendichte (pQCT) bei PKU-Pat. berichtet. 72 RöA der linken Hand von 26 Pat. mit PKU (Alter 5,2-19,3 J.; 13 m, 13 w; 1-6 RöA/Pat.) wurden mittels Digitaler X-Ray-Radiogrammetrie (DXR) analysiert und die kortikalen Knochenstatusparameter BMD (bone mineral density) und MCI (metacarpal index) durch automatisierte Messung an den Metacarpalia II-IV bestimmt. Alle Pat. standen zum Zeitpunkt der Anfertigung der RöA unter einer üblichen PKUDiät. BMD und MCI zeigen einen positiven Anstieg mit dem Alter und der Körperhöhe. Verglichen mit einem Referenzkollektiv (N=291) zeigte sich keine Verminderung der kortikalen Knochendichte Die DXR stellt ein einfach anwendbares, nicht invasives Verfahren zur Ermittlung des Knochenstatus dar. Unter diätetischer Behandlung sind bei unseren PKU-Pat. keine Hinweise auf das Vorliegen einer Osteoporose zu finden. Eine Verlaufskontrolle des Knochenstatus, z.B. mittels DXR bei PKU-Pat. bis ins Erwachsenenalter hinein wird jedoch empfohlen.

P14 Quantiﬁzierung von 17α-Hydroxy-Progesteron in Serum und Speichel mittels Tandem-Massenspektrometrie M Rauh*, I Knerr, M Gröschl, HG Dörr, W Rascher Kinder- und Jugendklinik, Universitätsklinikum Erlangen, Loschgestr. 15, 91054 Erlangen Die Konzentration von 17-Hydroxyprogesteron in Serum und Speichel ist ein wichtiger Marker bei der Diagnose und Therapiekontrolle des Adrenogenitalen Syndroms. Die Zuverlässigkeit von Immunoassays ist allerdings in Frage gestellt, insbesondere bei Neugeborenen und Kindern aufgrund von analytischen Interferenzen bedingt durch Kreuzreaktivitäten und Matrixeffekten. Unser Ziel war es, eine geeignete Analysenmethode zum Nachweis von 17α-OH-Progesteron mittels LC/ MS/MS zu entwickeln und zu validieren, die eine schnelle und einfache Quantifizierung erlaubt. Die Quantifizierungsgrenze beträgt 0,05 μg/L im Serum und Speichel (Probevolumen 100 μl). Die mittlere Widerfindung (VK) beträgt 100 (5). Ein Methodenvergleich ergibt für Serum (Neugeborene ausgeschlossen) und Speichel jeweils folgende Regressionsgeraden y (RIA, DSL) = 1.942 x (LC-MS/MS) + 0.255 (r = 0.695; n= 97), y (ELISA, IBL) = 1.050 x (LC-MS/MS) - 0,001 (r = 0.991; n = 45). Referenzwerte für Kinder wurden ermittelt. Das LC-MS/MS-Verfahren vermeidet Interferenzen insbesondere bei Neugeborenen und erlaubt einen hohen Durchsatz und kurze Analysezeiten.

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Intermediäre Hyperhomocysteinämie bei compound Heterozygotie von MTHFR-Mutation und Variante c.677C>T T Rummel1, T Suormala2, J Häberle1, C Berning¹, B Fowler2, HG Koch1 Univ. Kinderkliniken Münster1 und Basel2

Interim-Analyse des METABNET-Projekts „Outcome von Kindern mit benignen metabolischen Phänotypen“ C Weigel1, U Wendel2, FK Trefz3, C Haase4, AM Das5, M Rauh1, I Knerr1 1Kinder- und Jugendklinik, Universität Erlangen, 2Univ.-Kinderklinik Düsseldorf, Kliniken für Kinder- und Jugendmedizin, 3Reutlingen bzw. 4Jena, 5Kinderklinik, Med. Hochschule Hannover

Homozygotie für die häufige Variante c.677C>T (A222V) des MTHFRGens ist mit einer milden Hyperhomocysteinämie (tHcy < 30 μmol/l) assoziiert. Nicht bekannt ist, ob eine komplexe Heterozygotie dieser Variante mit anderen Mutationen zu höherem Homocystein führt. Analysiert wurden Fibroblasten von drei Patienten mit intermediärer Hyperhomocysteinämie (tHcy > 70 μmol/L). MTHFR-Restaktivität, Km NADPH und Methylen-THF sowie die Ki für AdoMet-Inhibition wurden in einem Enzymassay mit physiologischem Substrat untersucht. Eine Strategie, die auf der direkten Sequenzierung der 11 kodierenden Exone des MTHFR-Gens und der 2.2 kb cDNA beruht, ermöglichte eine Mutationsanalytik mit allelischer Zuordnung. Bei allen Patienten wurde eine Heterozygotie für bisher noch nicht beschriebene MTHFR-Mutationen identifiziert (D291N, E514fsX536, P202S). Auf dem jeweils anderen Allel wurde die Variante c.677C>T nachgewiesen. Ein Patient war homozygot für diese Variante. Die MTHFR-Enzymaktivität zeigte in allen Fällen Auffälligkeiten. Eine komplexe Heterozygotie der häufigen Variante c.677C>T und anderen Mutationen kann zu funktionell relevanten Veränderungen der MTHFR- Aktivität und einer intermediären Hyperhomocysteinämie führen. Diese Konstellation ist in unserer Bevölkerung relativ häufig.

P16 Myosonograﬁsche Charakterisierung neuromuskulärer Veränderungen bei Smith-Lemli-Opitz-(SLO)-Syndrom L von Rohden1, N Österreich2, S Pötzsch3, P Jira4, K Mohnike2 Klinik für Radiologie und Nuklearmedizin (Kinderradiologie)1, Klinik für Allgemeine Pädiatrie und Neonatologie2, O-v-G-Univ. Magdeburg, Fehlbildungsmonitoring Sachsen-Anhalt3, Univ. Med. Centre Nijmegen4, NL. Das SLO ist eine Stoffwechselerkrankung mit variabler Inzidenz; (~1:12.000). SLO-Pat. werden i.R. moderner Ther.-konzepte mit Simvastatin (SV) (HMG-CoA-Reduktasehemmer) +/- Cholesterol behandelt. Als NW einer SV-Ther. wurden vz. Rhabdomyolysen berichtet. 23 SLO-Pat. (14 m/ 9w) wurden im Alter von <1 - 18 J. untersucht. Eine Sonografie der Muskulatur erfolgte mit 10-15 MHz-Schallkopf (standardisierte Geräteeinstellung, Referenz: 16 alters- u. geschlechtsidentische gesunde Kinder). Bei ¼-jährl. Kontr. von CK, ALAT und ASAT zeigten sich unauffällige Werte. Alle SLO-Pat. wiesen fokale, polyzyklische, hyperechogene Herde in d. Muskulatur auf. Während 3-jähriger SV-Ther. ergab sich eine Befundkonstanz. Daneben waren sonografisch eine derbe fettarme hyperechogene Subkutis sowie Veränderungen an großen peripheren Nerven nachweisbar. Im Verlauf von 3 J. sind unter SV-Ther. die muskulären/neuralen Texturveränderungen konstant. Beim SLO werden charakteristische Befunde der Muskeltextur, Subkutis und peripheren Nerven gesehen. Hinweise für akute oder subakute Muskelnekrosen fanden sich nicht. Die Texturveränderungen der Muskulatur sind unabhängig von der SV-Therapie.

Im Neugeborenenscreening werden Patienten mit Störungen des Aminosäuren- oder Fettsäurenmetabolismus detektiert, aber auch benigne Varianten. Untersuchung auf Minorsymptome, Entwicklungstests, Labor wie Aminosäuren, Acylcarnitine, organische Säuren. Es erfolgte nur partiell eine prophylaktische Intervention (MCADD). Bislang wurden 133 asymptomatische Kinder rekrutiert (mittleres Alter 107 Monate): Milde Citrullinämie (n=18), 3-Methylcrotonylglycinurie (16), IVA (6), MSUD (2), Glutarylcarnitinerhöhung (1), Propionylcarnitinerhöhung (4), MCADD (54), VLCADD (1), HPA -Kontrollen (31). Klinische und laborchemische Daten werden vorgestellt. Die 133 Kinder entwickeln sich bislang unauffällig. Die Interim-Analyse zeigt einen altersgerechten Verlauf bei den 133 Teilnehmern. (Mit Unterstützung durch das BMBF)

P18 Optimierung der genetischen Versorgung von Patienten mit im Neugeborenen-Screening erfassten angeborenen Stoﬀwechselkrankheiten: Strukturierte Asservierung von DNA-Proben und Ergebnisse des Ringversuchs „Mutationsanalyse bei PKU“ im Rahmen von Metabnet J Zschocke, P Burgard Institut für Humangenetik und Universitäts-Kinderklinik Heidelberg Das „Zentrum für genetische Unterstützung bei angeborenen Stoffwechselstörungen“ im Rahmen des Stoffwechselnetzwerks „Metabnet“ hat als Auftrag, den gegenwärtigen Stand der Bereitstellung genetischer Leistungen für Ärzte und Patienten bezüglich der im NeugeborenenScreening erfassten Stoffwechselkrankheiten zu überprüfen und zu verbessern. Um als Serviceleistung die langfristige Asservierung von DNAProben von Patienten für Diagnostik- und Forschungszwecke anbieten zu können, haben wir eine Access-basierte Datenbank entwickelt, die einerseits die Proben mit vollständigen Patientendaten erfasst, andererseits projektspezifische Forschungsproben pseudonymisiert bereitstellen kann. Zur Verwendung der Proben ist das Einverständnis der Eltern notwendig, das auch ohne konkretes Forschungsprojekt prospektiv anhand von neu entwickelten Einverständniserklärungen eingeholt werden kann. Die zweite Runde des internationalen Ringversuchs zur Mutationsanalyse bei PKU zeigte eine enttäuschend geringe Teilnahme deutscher Labors, obwohl der Ringversuch für die deutschen Labors erneut kostenlos angeboten wurde. Von den teilnehmenden Labors zeigten 25  einen Genotypisierungsfehler, d.h., eine von zwei Mutationen wurde bei einem compound-heterozygoten Patienten nicht erkannt. Fragebogen-basierte Untersuchungen zum Stellenwert von Mutationsanalysen im diagnostischen Prozess und dem gegenwärtigen Stand der Vermittlung genetischer Kenntnisse an Patienten und ihre Familien wurden eingeleitet.

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Abstracts P19 Schweres Residualsyndrom nach metabolischer Entgleisung bei 3-Methylcrotonyl-CoA-Carboxylase-Mangel (3MCCD). Zwei Fallberichte. K Tsiakas, G Hillebrand, Z Lukacs, A Kohlschütter, M Baumgartner*, R Santer Univ Kinderkliniken Hamburg und *Zürich Ein generelles Neonatalscreenig auf 3MCCD wird in Deutschland seit 2005 nicht mehr empfohlen. Dies wurde begründet mit der insgesamt geringen Zahl symptomatischer Patienten im Vergleich zur hohen Rate biochemisch auffälliger Individuen im Neonatalscreening (einschl. Geschwister und Mütter), die klinisch nie symptomatisch wurden. Wir beschreiben daher zwei vor Einführung des erweiterten Neugeborenenscreenings geborene Kinder, die nach einer metabolischen Entgleisung ein schweres Residualsyndrom mit geistiger Behinderung und Hemiparese zurückbehielten. Fall 1 (Steen et al. 1999): Ein mild retardiertes Mädchen (16 Mo) entwickelte im Rahmen eines Infektes Hypoglykämien, fokale Anfälle und eine Hemiparese (mit hemilateralem Hirnödem im CT). 3-Methylcrotonylglyzin (3-MCG)- und 3-Hydroxyisovaleriansäure (3-HIVA)-Ausscheidung im Urin massiv erhöht, ebenso 3-Hydroxy(iso)valerylcarnitin (C5OH) im Blut (max 73 μM). 3-MCC-Aktivität in Lymphozyten und Fibroblasten nicht nachweisbar. Homozygotie für MCCA R385S. In vitro und in vivo keine Biotin-Responsivität. Fall 2: Wiederholte Neigung zu metabolischer Azidose und Hypoglykämie während respiratorischer Infekte ohne weitergehende Diagnostik. Dritter stationärer Aufenthalt (mit 3J) mit erneuter Symptomatik, fokalen Anfällen und Hemiparese bei halbseitigem Hirnödem. 3-MCG und 3-HIVA im Urin massiv erhöht, C5OH max. 27,5 μM. 3-MCC-Aktivität in Fibroblasten nicht nachweisbar. Molekulargenetik ausstehend. In vitro und in vivo keine Biotin-Responsivität. Einzelfallbeobachtungen erlauben selbstverständlich keine Bewertung des generellen Nutzens eines Screenings, hierzu sind prospektive Untersuchungen erforderlich. Bei beiden Fällen hätte aber ein erweitertes Neugeborenen-Screening vermutlich die frühe Diagnosestellung erleichtert und den Verlauf günstig beeinflusst.

P20 Substratinhibitionstherapie bei Niemann-Pick C, 2 Jahre Therapieerfahrung R Hartung, Y Amraoui, R König, E Mengel, M Beck Kinderklinik, Universität Mainz Fallbericht: Wir berichten über ein Geschwisterpaar mit NiemannPick Typ C. Die Diagnose wurde bei der älteren der beiden Schwestern mit 5 1/2 Jahren aufgrund einer vertikalen Blickparese und motorischer Ungeschicklichkeit gestellt. Im Folgenden kam es zu einer rasch fortschreitenden Verschlechterung mit Rollstuhlpflichtigkeit, autistischem Erscheinungsbild und therapieresistenter Epilepsie im Alter von 7 Jahren und Exitus letalis mit 9 1/2 Jahren. Die 2 Jahre jüngere Schwester zeigte zum Zeitpunkt des Therapiebeginns im Alter von 5 1/2 Jahren ebenfalls eine vertikale Blickparese. Unter Therapie mit Miglustat zeigten sich die motorischen Fähigkeiten bei bestehender vertikaler Blickparese über einen Zeitraum von 2 Jahren weitestgehend stabil. Die kognitive Leistungsfähigkeit zeigte in den jährlichen Testungen keine Verschlechterung bei in der unteren Norm gelegenen Leistungen. AEP und SSEP waren stets unauffällig. Das VEP zeigte zu Therapiebeginn eine hohe kortikale Antwort, die im Verlauf nach 2 Jahren eine abnehmende Tendenz zeigt. Nebenwirkungen waren außer wiederholten milden Diarrhoen mit vorübergehender Gewichtsabnahme bei Therapiebeginn nicht beobachtet worden. Folgerung: Der Vergleich der beiden Fälle zeigt eindrucksvoll den unterschiedlichen Verlauf der Erkrankung mit versus ohne Therapie. In Anbetracht der zukünftig möglichen Therapie ist es besonders wichtig

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Monatsschrift Kinderheilkunde 6 · 2006

die Zeit von Beginn der ersten Symptome bis zur Diagnose zu verkürzen, um die Therapie so früh wie möglich einleiten zu können.

P21 Costello - Syndrom: eine wichtige Diﬀerentialdiagnose zu Mukopolysaccharidosen G Hillebrand *, C Hübner+, R Santer *, Al Schulze +, K Tsiakas*, K Kutsche+, K Ullrich* *Kinderklinik und +Inst. für Humangenetik, Univ.-Klinikum Hamburg Eppendorf Bei Kindern mit einer Entwicklungsverzögerung, vergröberten Gesichtszügen (prominente Lippen, Makroglossie), Minder wuchs und relativer Makrozephalie, rauher Stimme, eingeschränkter Streckbarkeit der Ellenbogengelenke und Kardiomyopathie oder Pulmonalstenose ist von metabolischer Seite an eine Mukopolysaccharidose/Glykoproteinose zu denken. Diese Symptome werden aber auch beim Costello-Syndrom gefunden, einer Krankheit, die mit heterozygoten Mutationen im HRAS-Proto-Onkogen einhergeht. Wir berichten über zwei Patienten mit Costello-Syndrom, stellen spezifische Befunde dar und beschreiben neue diagnostische Möglichkeiten durch eine molekulargenetische Untersuchung. Patient 1. Der neun Monate alte Patient fiel seit dem 6. LM durch mentale und motorische Entwicklungsverzögerung und eine schwere Gedeihstörung auf. Die Inspektion zeigte syndromale Stigmata (Epikanthus, flache Nasenwurzel, aufgeworfene Lippen, verdickte Ohrläppchen, vergröberte Gesichtszüge, Cutis laxa an Händen und Füßen, krauses Haupthaar). Intermittierend supraventrikuläre Tachykardie. Patientin 2. Die heute 14jährige Patientin zeigte postnatal eine muskuläre Hypotonie, dysmorphe Stigmata, Cutis laxa, Trinkschwäche und Gedeihstörung, zudem deutliche psychomotorische Entwicklungsverzögerung. Echokardiographisch ASD II mit Pulmonalstenose. Diagnostik: Glucosaminoglycan (GAG)-Urinelektrophorese und Enzymaktivitätsmessungen in Leukozyten und Plasma zeigten Normbefunde (Pat. 1). Bei beiden Patienten gelang der Nachweis einer heterozygoten Mutation, c.34G>A (p.G12S), im HRAS-Gen, die de novo vorliegt.Fazit: Ein Leitsymptom, das das Costello-Syndrom von einer MPS abgrenzt, ist die Cutis laxa. Weiter finden sich, allerdings meist erst im Verlauf, periorificielle Papillome und eine Prädisposition zu Tumoren. Die GAG-Ausscheidung ist bei Costello-Syndrom normal, auch eine Dysostosis multiplex findet sich nicht. Die bisher rein klinische Diagnose kann seit kurzem durch Mutationsnachweis im HRAS-Gen molekulargenetisch bestätigt werden. Der Gendefekt führt vermutlich zu einer veränderten Ras-Signalkaskade und damit sekundär zu Stoffwechseldefekten wie einer Akkumulation von Chondroitinsulfat-tragenden Proteoglykanen in der extrazellulären Matrix von Hautfibroblasten der Patienten und einer gestörten Elastinfaserbildung.

P22 Genotypisches und phänotypisches Spektrum der Hypercholesterinämie Typ IIa MA Lee-Kirsch1, A Näke1, K Franke2, C Ehlers2, M Gahr1 1Klinik für Kinder- und Jugendmedizin, Technische Universität Dresden, Fetscherstr. 74, 01307 Dresden, 2Praxis für Medizinische Genetik, Friedrichstr. 38-40, 01067 Dresden Typ IIa zählt zu den häufigsten Ursachen einer familiären Hypercholesterinämie. Aufgrund des erhöhten kardiovaskulären Erkrankungsrisikos im Erwachsenenalter ist eine cholesterinsenkende Therapie indiziert. Langzeitbeobachtung von Kindern mit familiärer Hypercholesterinämie und molekulargenetisch nachgewiesener heterozygoter Mutation im LDL-Rezptorgen.

Alter bei LDLR Diagnose, Mutation Geschlecht

Chol (mmol/l)

LDL (mmol/l)

HDL (mmol/l)

TG (mmol/l)

Gewicht (kg) Perzentile

Größe (cm) Perzentile

BMI (kg/m2) Perzentile

RR (mmHg)

Therapie

5m

c.671A>T

10,06

6,93

2,03

0,91

18,6 (19)

111,5 (15)

14,9 (37)

117/65

Diät

15 m

c.671A>T

9,23

6,36

1,66

0,97

161 (5)

45,1 (5)

17,4 (12)

116/73

Diät

16 m

D245E

6,53

4,96

1,32

0,5

179 (50)

64 (35)

19,9 (33)

160/86

Diät, Ezetrol

10 w

Del Exon 16

7,14

5,31

1,33

0,93

39 (69)

148,7 (77)

17,6 (66)

111/70

Diät, Ezetrol

3m

Del Exon 16

9,71

7,51

1,2

0,93

16,4 (88)

98,5 (81)

16,9 (80)

109/62

Diät

7m

D245E

6,68

4,63

1,3

1,05

21,9 (29)

117 (11)

16 (59)

108/65

Diät, Ezetrol

6w

c.599A>G

7,56

5,46

2,1

0,63

31,9 (69)

128 (18)

19,5 (88)

126/64

Diät

10 m

c.1428insC

7,69

5,81

1,1

1,43

61,6 (99)

157 (99)

24,7 (99)

154/84

Diät, Pravastatin, Ezetrol, Allopurinol

9w

c.657delC

9,11

6,82

1,3

1,2

34,3 (67)

139,6 (62)

17,7 (67)

97/61

Diät, Ezetrol

10 w

c.1637G>A 10.1

8,1

1,4

1,3

27,6 (25)

138 (58)

14,5 (13)

104/66

Diät, Ezetrol

14 w

D245E

7,32

5,43

1,3

1,3

57,9 (53)

163,7 (36)

21,6 (64)

119/62

Diät, Ezetrol

12 m

c.1775G>A 7,57

5,85

1,1

0,9

49 (72)

159 (73)

19,6 (67)

130/90

Diät, Ezetrol

12 m

Del Exon 7,8

8,78

7,22

1,1

1,1

47,3 (70)

155 (60)

19,7 (71)

95/65

Diät, Pravastatin, Ezetrol

14 w

Del Exon 7,8

9,31

7,84

1,1

1,3

80 (99)

167 (72)

28,7 (98)

130/80

Diät, Pravastatin, Ezetrol

9m

c.1171G>A 4,25

2,23

1,1

0,77

31 (56)

134 (38)

17,2 (66)

95/50

keine

5m

c.1329G>C

4,02

1,56

0,75

19 (31)

114 (41)

14,6 (28)

95/55

Diät, Ezetrol

6,19

Das klinische und genotypische Spektrum der Hypercholesterinämie Typ IIa bei Kindern ist sehr breit. Die Beurteilung der Auswirkung einer therapeutischen Intervention im Kindesalter auf die kardiovaskuläre Morbidität im Erwachsenenalter erfordert prospektiv angelegte Langzeitstudien.

P23 Klinische Charakteristika und Koppelungsanalyse bei einer großen konsanguinen türkischen Familie mit CDG (Congenital Disorders of Glycosylation) Typ Ix. J Vodopiutz 1, CB Item1, WM Schmidt 2, R Ratschmann1, OA Bodamer1 1 Bereich für angeborene Stoﬀwechselerkrankungen und pädiatrische Genetik, Allgemeinpädiatrie, Universitäts- Kinderklinik, Medizinische Universität Wien, 2 Klinische Pharmakologie, Medizinische Universität Wien Ziel: Identifizierung eines Kandidatengens in einer großen konsanguinen türkischen Familie mit CDG Typ Ix und Beschreibung des klinischen Phänotyps betroffener Familienmitglieder. CDG Typ I Muster, mittels isoelektrischer Fokussierung des Transferrins, bei 5 Familienmitgliedern (2M/3F; 3-22 Jahre; 1M verstorben) einer konsanguinen ost-türkischen Großfamilie. Nach dem enzymatischen und/oder molekulargenetischen Ausschluss von CDG Typ Ia-i, genomweite SNP Scan Strategie (Affymetrix GeneChip 10K 2.0) zur Identifikation potentieller Erkrankungs-Loci, sowie anschließende Mutationsanalyse des Kandidatengens. Genomweiter SNP Scan: LOD Score von 5.5 zwischen SNP_A-1516465 und SNP_A-1517315 auf Chromosom 16p13.3. In dieser Region liegt das ALG1 Gen, welches die beta- 1,4 Mannosyltransferase kodiert. ALG1 Mutationen konnten kürzlich als kausativ für CDG Typ Ik identifiziert

werden und wurden mit einem schweren klinischen (therapierefraktäre Epilepsie, Hydrops fetalis) und früh letalem (3 Wochen bis 10 Monate) Phänotyp assoziiert. ALG1 Mutationsanalyse: Noch nicht bei allen Familienmitgliedern abgeschlossen. Klinische Charakteristika: Alle 5 betroffenen Familienmitglieder wurden termingerecht, nach unauffälliger Schwangerschaft geboren. Gemeinsame Leitsymptome beinhalten globale psychomotorische Entwicklungsverzögerung (5/5), milde faziale Dysmorphiezeichen (5/5), alternierender Strabismus (4/5), und Fieberkrämpfe (4/5). Weitere Symptome beinhalten therapierefraktäre oder schwer einstellbare epileptische Anfälle (2/5), muskuläre Hypotonie (2/5), abgeschwächte Muskeleigenreflexe (2/5), cerebelläre Zeichen (2/5), mangelnde Gewichtszunahme (1/5) und gastrointestinale Symptome (1/5). Es zeigt sich eine beträchtliche intrafamiliäre Variabilität der Symptome. Ein betroffener Bub litt an rezidivierender und selbstlimitierender Epistaxis und starb im Alter von sieben Jahren an den Folgen eines Budd Chiari Syndroms und mehrmaligen Stroke-Like-Episoden. Erstpräsentation von fünf CDG-betroffenen Familienmitgliedern aus einer einzigen hoch-konsanguinen Großfamilie mit CDG Typ Ix. Ergebnisse der Koppelungsanalyse und der abgeschlossenen ALG1-Mutationsanalyse bei drei (3/5) CDG-Betroffenen und einem (1/3) Elternpaar lassen das Vorliegen eines CDG Typ Ik vermuten. Hinweise für deutliche intra- and inter-familiäre Variabilität der Symptome bei CDG Typ Ik.

Monatsschrift Kinderheilkunde 6 · 2006

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20. Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft für Pädiatrische Stoffwechselstörungen

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