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Bericht: Spezielle analytische Methoden: 4. Analyse yon biologischem Material

~ b e r die Bestimmung der Basenzusammensetzung in D3~S dureh Abspalten der Purinbasen berichten P. C. HUA•G und E. ROSE,BERG [1]. Verff. werten die Tatsache aus, dal3 sich nach C. TAIvI~, M. E. Ho])~,s und E. CI~ARGAFF[2] bei p H 1,58 nut die Purinbasen selektiv und quantitativ aus DNS in Freiheit setzen lassen. Da bei einer Doppelstrang-DNS ein Guanin einem Cytosin und ein Adenin einem Thymin entspricht, ]assert sich die Basen bestimmen, wenn man die abgespaltenen und dialysierten Purinbasen bestimmt. Das ist durch Emittlung des Extinktionsverh~ltnisses E265/E2s o mSglich. Wie Beispiele mit 12 verschiedenen DNS zeigen, erh~lt man gute Werte. Einzelheiten einschliel31ich Berechnungsgleichungen geben Verff. an. [1] Anal. Biochem. 16, 107--113 (1966). Dept. Bioehem., J. Hopkins Univ. School Hyg. a. Public Health, Baltimore, Md. (USA). -- [2] J. Biol. Chem. 195, 49 (1952). E. Mi3LLm~, Marburg ]~ine Mikromethode zur Bestimmnng yon l~ueleotiden im tIydrolysat yon RNS teilen J. M. GEBI(JKI und S. FI~ED [1] mit. Dabei handelt es sich um eine Modifikation des yon L. JOSEFSSON [2] angegebenen Diinnschichtverfahrens, die haupts~chlieh darin besteht, dal] man start mit Kalilauge mit Lithiumhydroxid hydrolysiert. Die bei der Trennung sehr stSrenden Salze lassen sich als Lithiumehlorat mit Ather-Isopropanol (2:1) restlos ohne St6rung beseitigen. Auf Cellulose/Silicagel HFe54 (9 : 1) erh~lt man mit Isopropanol-Ammoniak-Wasser (60: 35 : 1,75) sowohl gute Trennung als auch Ausbeute (96 • 40/0 bis 100 • 5~ Verff. geben mit einer Tabelle belegte Einzelheiten an. [1] Anal. Biochem. 14, 253--257 (1966). Chem. Dept., Brookhaven Nat. Lab., Upton, New York (USA). -- [2] Biochim. Biophys. Aeta 72, 133 (1963). E. Mt)sLV.l~, Marburg Die Analyse groller 01igonucleotidbruehstiieke der Hefealanintrans[erribonucleinsi~ure~ die bei der unvol]st~ndigen Spaltung mit Ribonuclease T1 entstehen, sehildern J. AttAR, G.A. EVERETT und R . W . HOLLEr [1]. Verff. lassen TakaDiastaseribonuclease TI nur 1 Std bei 0 ~C auf das in Frage stehende Substrat einwirken und fraktionieren die so gewonnenen grol]en Bruchstiicke an 0,35 • 200 em DEAE-Celhloses~ulen. Die Oligonueleotide spalten Verff. dutch l~ngere Einwirkung yon l~ibonuclease T1 [2] nnd best~tigen die bekannte Sequenz [3]. Bei 2 0]igonucleotiden verwenden Verff. noeh Mikrokokkennuclease [4]. Die Untersuchungen sind mit Diagrammen und sehr ausfiihrlichen Tabellen belegt. [1] J. Biol. Chem. 241, 1206--1211 (1966). Agr. Res. Serv., Dept. Agr. Biochem., Cornell Univ., Ithaca, N. Y. (USA). -- [2] APcAI~, J., G. A. EVERETT, and R. W. HOLLEY: Proc. Nat. Acad. Sci. 53, 546 (1965). -- [3] HOLLEY, l~. W., J. APGAR, g. A. EVERETT, J. T. ~kDISON, M. M~kRQUISEE, S. H. MERRILL, J. ~. PENSWlCK, and A. ZA~IR: Science 147, 1462 (i965). -- [4] ZAnilY, A., R. W. HOLLEY, and M. M.ARQUISEE" J. Biol. Chem. 240, 1267 (1965). E. Mi)LLER, Marburg tiber die Siiulen-(~hromatog-raphie yen Nueleotiden an Thymidylateellulose berichten E. G. SANDER, D. B. McCoRMICK und L. D. WI~IGHT[1]. In Analogie zu anderen Adsorbentien [2] trennen Verff. Nucleoside und Nucleotide fiber Thymidylatcellulose, deren Darstellung aus 5'-Thymidylat und Cellulose mit Dieyclohexylearbodiimid in Pyridin sie genau beschreiben. Bei 5~ und hoher Salzkonzentration werden Adenosin, 5'-Adenylat und Polyadenylat selektiv zurfickgehalten. Bei 25~ lassen sich Polyadenylat und 15sliche Hefenucleinsaure gut eluieren. [1] J. Chromatog. 21, 419--423 (1966). Graduate School Nutrition a. Biochem. Section of the Div. Biol. Sei., Conell U n i v , Ithaca, N. Y. (USA). -- [2] E R ~ , S., L. G. NoRTn~vp, and F. R. LEAch: Proc. Nail. Acad. Sci. U. S. fi], 646 (1965). E. M~LLER, Marburg